[发明专利]使用古细菌丝氨酸蛋白酶的方法

权利要求书

1.一种重组构建体，该重组构建体包含编码具有丝氨酸蛋白酶活性的热稳定多肽的核苷酸序列，其中所述编码核苷酸序列与至少一个在生产宿主中起作用的调控序列有效地连接，并且所述核苷酸序列编码具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的多肽、或与其具有至少92％氨基酸序列同一性的多肽；

并且其中所述调控序列对于所述编码核苷酸序列是异源的，或者所述调控序列和所述编码序列并非如自然界中一起发现的那样排列。

2.如权利要求1所述的重组构建体，其中所述编码核苷酸序列是编码具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的多肽、或与其具有至少89％氨基酸序列同一性的多肽的核苷酸序列。

3.如权利要求1或2所述的重组构建体，其中所述编码核苷酸序列选自由以下组成的组：

i)编码具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的多肽、或与其具有至少86％氨基酸序列同一性的多肽的核苷酸序列；或

ii)编码具有SEQ ID NO:5或14所示的氨基酸序列的多肽、或与其具有至少84％氨基酸序列同一性的多肽的核苷酸序列。

4.如权利要求1至3中任一项所述的重组构建体，其中所述至少一个调控序列包含启动子。

5.一种载体，其包含如权利要求1至4中任一项所定义的重组构建体。

6.一种生产宿主或宿主细胞，其包含如权利要求1至4中任一项所述的重组构建体。

7.如权利要求6所述的生产宿主或宿主细胞，其中所述细胞是细菌细胞、古细菌细胞、真菌细胞或藻类细胞。

8.一种用于生产热稳定丝氨酸蛋白酶的方法，所述方法包括：

i)用如权利要求1至4中任一项所定义的构建体转化宿主细胞；以及

ii)在产生所述热稳定丝氨酸蛋白酶的条件下，培养步骤(i)的转化的宿主细胞。

9.如权利要求8所述的方法，所述方法进一步包括从所述宿主细胞回收所述热稳定丝氨酸蛋白酶。

10.如权利要求8或9所述的方法，其中所述宿主细胞是细菌细胞、古细菌细胞、真菌细胞或藻类细胞。

11.一种培养物上清液，其包含通过如权利要求8至10中任一项所述的方法获得的热稳定丝氨酸蛋白酶。

12.一种用于水解衍生自玉米的材料的方法，所述方法包括：

(a)使从玉米中获得的材料与液体接触以形成醪液；和

(b)通过使水解产物与包含热稳定丝氨酸蛋白酶的酶混合物接触而水解醪液中的至少一种蛋白质以形成水解产物，所述丝氨酸蛋白酶包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:3具有至少92％序列同一性的氨基酸序列，以及

(c)任选地，回收步骤(b)中获得的水解产物。

13.一种动物饲料、喂养料、饲料添加剂组合物或预混物，其包含至少一种具有丝氨酸蛋白酶活性并且是热稳定的多肽，其中所述多肽包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列、或与其具有至少92％序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述动物饲料、喂养料、饲料添加剂组合物或预混物任选地进一步包含(a)至少一种直接饲喂微生物、或(b)至少一种其他酶、或(c)至少一种直接饲喂微生物和至少一种其他酶。

14.如权利要求13所述的饲料添加剂组合物，其中所述饲料添加剂组合物进一步包含至少一种选自由以下组成的组的组分：蛋白质、肽、蔗糖、乳糖、山梨糖醇、甘油、丙二醇、氯化钠、硫酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠、甲酸钠、山梨酸钠、氯化钾、硫酸钾、乙酸钾、柠檬酸钾、甲酸钾、乙酸钾、山梨酸钾、氯化镁、硫酸镁、乙酸镁、柠檬酸镁、甲酸镁、山梨酸镁、焦亚硫酸钠、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。