[发明专利]表达细胞相连的异源蛋白的重组酵母宿主细胞

权利要求书

1.一种用于由重组酵母宿主细胞制备细胞相连的异源蛋白的方法，所述方法包括根据面包酵母生产方法将所述重组酵母宿主细胞在置于容器中的培养基中增殖，以允许所述细胞相连的异源蛋白的表达，其中所述重组酵母宿主细胞具有编码所述细胞相连的异源蛋白的异源核酸分子，并且所述异源核酸分子与异源启动子可操作地相连，所述异源启动子允许所述异源核酸分子在增殖期间的表达。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述面包酵母生产方法是连续方法。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述面包酵母生产方法是补料分批方法。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述重组酵母宿主细胞在所述增殖期间的比生长速率为0.25h^-1或更小。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，进一步包括将所述容器的通气速率控制为至少约0.5个空气体积/容器体积/分钟。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述通气速率为至少约1.0个空气体积/容器体积/分钟。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述培养基包括碳水化合物源、氮源和磷源。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述碳水化合物源来自糖蜜、玉米、甘油和/或木质纤维素生物质。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述氮源是氨。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述磷源是磷酸。

11.根据权利要求7至10中任一项所述的方法，其中所述培养基进一步包含一种或多种微量营养素。

12.根据权利要求5至11中任一项所述的方法，进一步包括控制碳水化合物源向所述培养基中的添加以限制所述重组酵母宿主细胞的生长速率。

13.根据权利要求12所述的方法，包括相对于所述培养基的总体积，将所述碳水化合物源的浓度维持在0.1重量％或更小。

14.根据权利要求13所述的方法，其中相对于所述培养基的总体积，将所述碳水化合物源的浓度维持在0.0001重量％或更小。

15.根据权利要求5至14中任一项所述的方法，进一步包括添加氮源和/或磷源以匹配所述重组酵母宿主细胞的生长速率。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，进一步包括将所述培养基的pH控制在约4.0至5.0。

17.根据权利要求16所述的方法，包括将所述培养基的pH控制在约4.5。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，进一步包括将所述培养基的温度控制在约20℃至约40℃。

19.根据权利要求18所述的方法，包括将所述培养基的温度控制在约30℃至约35℃。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中在增殖步骤之后，所述重组酵母宿主细胞的浓度为所述培养基总体积的至少0.25重量％。

21.根据权利要求20所述的方法，其中在所述增殖步骤之后，所述重组酵母宿主细胞的所述浓度为所述培养基总体积的至少1重量％。