[发明专利]细胞培养方法及装置

说明书

本发明的目的在于提供一种细胞培养方法，其能够在使用形成有多个凹部的细胞培养袋进行细胞培养时，通过更换培养基时防止细胞流动的同时提高培养基的更换效率，从而提高细胞培养和分化诱导的效率。本发明提供细胞培养方法，所述方法使用具有袋主体(2)和安装于袋主体(2)的端口(3)的细胞培养袋(1)，所述袋主体(2)由密封周边部的上表面膜(21)和下表面膜(22)构成，其中将细胞培养袋(1)装载至支架(5)的装载面(5a)，在从端口(3)进行培养基(S)的注入或排出期间，利用具有与装载面(5a)实质上平行的底面(6a)的按压构件(6)从上按压上表面膜(21)。

技术领域

本发明涉及细胞培养方法及装置，更具体而言涉及使用细胞培养袋的细胞培养方法及装置。

背景技术

近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，亟需将细胞(包括组织、微生物、病毒等)在人工的环境中效率良好地大量培养、诱导分化。

在这样的细胞培养中，为了避免污染的风险，有时使用闭锁体系的细胞培养袋。细胞培养袋例如由将周边部密封的塑料膜构成的袋主体和安装于袋主体的端口构成。

在使用了细胞培养袋的细胞培养中，需要避免细胞培养袋内的细胞浓度的不均，将细胞浓度保持在合理的范围。即，是由于在伴随细胞的增殖而培养基中的细胞浓度升高时，由于增殖所需要的培养基成分的枯竭、细胞自身的代谢产物的蓄积等而使细胞的生长受到阻碍，细胞的增殖效率降低，另一方面，如果培养基中的细胞浓度过低，则细胞的增殖、诱导分化的效率也降低。

特别是，在使用了设有多个凹部的细胞培养袋的球状体培养中，使细胞数变得均一的方式将细胞接种，使得在各凹部中形成适当的大小的球状体(细胞凝聚团块)。然后，谋求以使得各凹部的球状体的大小均一的方式，至培养结束为止保持每1个凹部1个球状体。

另外，在专利文献1中记载了通过在袋主体的底面设置多个凹部从而抑制了细胞培养袋内的细胞的移动的细胞培养袋。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2009-11260号公报

发明内容

发明所要解决的问题

细胞的培养通常需要数天至数周的时间。在使用了细胞培养袋的细胞培养中，在培养期间保持闭锁体系原样，根据需要而进行培养基更换。在培养基更换中，经由与端口连接的送液管，保持细胞残留在细胞培养袋内的状态而使细胞培养袋内的旧的培养基从端口排出，然后，从端口向细胞培养袋内注入新的培养基。

另外，在培养基更换中，存在在细胞培养袋的上表面膜产生诸如褶皱、歪斜的起伏的情况。特别是如图9(a)所示，对使上表面膜21为膨出形状的细胞培养袋10而言，与将两块塑料膜叠合并仅将周边部密封的的平袋状的容器相比，在即使将容器内用培养基充满，提起周边部下表面膜22也较少变形的方面优异，但在上表面膜21容易产生起伏。

如果保持在细胞培养袋10的上表面膜21产生起伏，使得细胞培养袋1内的培养基S的厚度变得不均一的状态继续进行培养基S的排出，则如图9(b)所示，与培养基的S的厚度厚的区域Sb相比，上表面膜21在培养基S的厚度薄的区域Sa中更早与下表面膜22进行局部接触。结果存在会将细胞培养袋1内的培养基S离断而形成间断部分的情况D。

如果细胞培养袋10形成间断部分D，则如图9(c)所示，即使从端口3吸引培养基S，也只将位于比间断部分D靠前的培养基S排出。一方面，位于比间断部分D靠里的残留培养基S1不被排出，会剩在细胞培养袋1内。结果培养基S的更换效率降低而细胞的培养、诱导分化效率会降低。