[发明专利]用于多靶标扩增的避免二聚体的多重聚合酶链式反应

权利要求书

1.一种方法，其包括以下步骤：

使用反向引物混合物从含有至少一种靶序列的mRNA中反转录cDNA的至少一个第一条链，形成至少一个第一条链cDNA；

其中所述反向引物混合物含有至少一个反向引物，所述反向引物被配置以将反向共用引物结合位点掺入cDNA的每个第一条链中；

通过去除未使用的反向引物混合物，选择每个第一条链cDNA；

使用正向引物混合物从所述cDNA的至少一个第一条链中的每个中合成cDNA的至少一个第二条链，形成至少一个第一条链:第二条链复合物；

其中所述正向引物混合物含有至少一个正向引物，每个正向引物被配置以结合特定的cDNA第一条链，并将正向共用引物结合位点掺入cDNA的每个第二条链中；

通过去除未使用的正向引物混合物，选择每个第一条链:第二条链复合物；

使用与至少一个反向共用引物结合位点结合的反向共用引物并使用与至少一个正向共用引物结合位点结合的正向共用引物扩增cDNA链；和

选择经扩增的cDNA链。

2.权利要求1所述的方法，其进一步包括使用与所述至少一个反向共用引物结合位点结合的反向共用引物并使用与所述至少一个正向共用引物结合位点结合的正向共用引物扩增经扩增的cDNA链的步骤。

3.权利要求1所述的方法，其中所述反向引物混合物包含至少一个反向引物，其中所述至少一个反向引物包含掺入到每个第一条cDNA链中作为鉴定标志物的另外的核苷酸。

4.权利要求1所述的方法，其中所述正向引物混合物包含至少一个正向引物，其中所述至少一个正向引物包含掺入到每个第二cDNA链中作为鉴定标志物的另外的核苷酸。

5.权利要求1所述的方法，其中每个选择包括使用磁珠从引物混合物中分离cDNA链。

6.权利要求1所述的方法，其中每个选择包括通过柱纯化从引物混合物中分离cDNA链。

7.权利要求1所述的方法，其中每个选择包括引物混合物的酶切割。

8.权利要求1所述的方法，其中所述第一条链cDNA包含第一条链cDNA:RNA复合物。

9.权利要求1所述的方法，其中所述mRNA获自单个细胞。

10.一种方法，其包括以下步骤：

使用第一引物混合物从含有至少一个靶序列的基因组DNA合成DNA的至少一个第一条链，形成第一条链:DNA复合物；

其中所述第一引物混合物含有至少一个第一引物，每个第一引物被配置以结合特定的靶序列并将第一共用引物结合位点掺入DNA的每个第一条链中；

通过去除未使用的反向引物混合物，选择每个第一条链:DNA复合物；

使用第二引物混合物从DNA的至少一个第一条链中的每个合成DNA的至少一个第二条链，形成第一条链:第二条链复合物；

其中所述第二引物混合物含有至少一个第二引物，每个第二引物被配置以结合特定的DNA第一条链，并将第二共用引物结合位点掺入DNA的每个第二条链中；

通过去除未使用的正向引物混合物，选择每个第一条链:第二条链复合物；

使用与至少一个第一共用引物结合位点结合的第一共用引物并使用与至少一个第二共用引物结合位点结合的第二共用引物扩增所述DNA链；和

选择经扩增的DNA链。

11.权利要求10所述的方法，

其中所述第一引物混合物为反向引物混合物，其中每个第一引物为反向引物，其中每个第一共用引物为反向共用引物，且其中每个第一共用引物结合位点为反向共用引物结合位点；和

其中所述第二引物混合物为正向引物混合物，其中每个第二引物为正向引物，其中每个第二共用引物为正向共用引物，且其中每个第二共用引物结合位点为正向共用引物结合位点。