[发明专利]在哺乳动物干细胞中进行基因组编辑的方法

权利要求书

1.一种在哺乳动物干细胞中提高编辑目标基因组DNA效率的方法，其特征在于，所述方法包括：将细胞凋亡调控因子、基因组编辑组合物和BCL抑制因子引入哺乳动物干细胞中，生成过表达所述细胞凋亡调控因子的经修饰的哺乳动物干细胞；其中，

所述细胞凋亡调控因子为BCL-XL，所述BCL-XL的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述基因组编辑组合物包括核酸内切酶，所述核酸内切酶在哺乳动物干细胞的基因组DNA的所需目标序列内进行切割，并编辑目标基因组DNA；所述核酸内切酶为RNA-引导的核酸内切酶；所述RNA-引导的核酸内切酶为Cas9；所述基因组编辑组合物包括引导RNA；

所述BCL抑制因子为ABT-263；

所述哺乳动物干细胞为iPSC；

所述方法为非疾病诊断和治疗方法。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将细胞凋亡调控因子和基因组编辑组合物引入哺乳动物干细胞中包括：将所述细胞凋亡调控因子进入所述哺乳动物干细胞中，生成所述过表达所述细胞凋亡调控因子的经修饰的哺乳动物干细胞；以及将所述基因组编辑组合物引入所述经修饰的哺乳动物干细胞中。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述引导RNA包括成簇的规律间隔的短回文重复RNA和tracrRNA。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因组编辑组合物还包括供体质粒，所述供体质粒包含供体序列，其中，通过同源定向修复在插入位点将所述供体序列插入基因组中。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述BCL XL被稳定表达或瞬时过表达。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述BCL XL过表达1小时至72小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在背景上，所述BCL XL被过表达至少5倍。