[发明专利]用于引起针对HBV的免疫应答的病毒样粒子

说明书

本发明的目的在于提供针对各种基因型的HBV引发免疫反应的抗原，并提供含有数种以上HBs‑L抗原蛋白的病毒样粒子或将它们组合而成的病毒样粒子组合物。

技术领域

本发明涉及用于引起针对HBV的免疫应答的病毒样粒子。另外，本发明涉及用于引起针对HBV的免疫应答的病毒样粒子组合物。另外，本发明涉及含有上述物质作为有效成分的、HBV的治疗用及/或预防用疫苗。

背景技术

B型肝炎是由B型肝炎病毒(本说明书中，有时将其称为“HBV”)导致的感染症。该疾病作为以急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌等为代表的各种肝脏疾病的主要原因而为人所知。HBV的感染者据说在全世界有3亿人，B型肝炎是世界性的健康问题之一。

HBV是由位于中心的DNA、和围绕其的衣壳构成的粒子，还具有在其表面的脂质膜中包含多种蛋白质的包膜结构(envelope structure)。该包膜是位于病毒最外部的结构，可用于HBV的免疫学检测，因此有时也将其称为表面抗原(图1)。

将形成HBV的表面抗原的全长蛋白称为L蛋白，自呈递至粒子最外部N末端起依次存在Pre-S1区、Pre-S2区及S区这三个区(图1)。Pre-S1区起到作为在HBV对人肝细胞进行感染时来识别细胞、与细胞结合的感受器的作用。人肝细胞具有NTCP受体作为针对HBV的受体(非专利文献1)。需要说明的是，在来源于未感染HBV的人肝细胞的细胞系中使该NTCP受体高水平表达后得以感染HBV(非专利文献2)，因此，最近，使用这样的细胞来确认HBV的感染防御效果的技术得到了广泛利用。

将自全长的被称为L蛋白的HBs-L抗原蛋白缺失Pre-S1区、由Pre-S2区及S区组成的蛋白称为M蛋白，并将自HBs-L抗原蛋白缺失Pre-S1及Pre-S2区、仅由S区组成的蛋白称为S蛋白。需要说明的是，本领域中，存在以HBV的表面抗原(Hepatitis B Surface Antigen，HBsAg)表示仅由S蛋白组成的S抗原粒子等用语的定义暧昧的情况。但在本说明书中，只要无特殊说明，则就HBV表面抗原蛋白而言，将仅由S蛋白组成的抗原粒子定义为S抗原或HBs-S抗原，将仅由M蛋白组成的抗原粒子定义为M抗原或HBs-M抗原，并将仅由L蛋白组成的抗原粒子定义为L抗原或HBs-L抗原(图1)。

上述各种HBV的抗原蛋白可在以导入了编码其的基因的酵母或动物细胞等真核细胞作为宿主细胞的表达系中制备，如此进行了基因重组的表面抗原作为针对HBV的预防用疫苗而得到广泛利用。其中，使用酵母中产生的S抗原是当前市场中的主流。例外地，利用了含有使用CHO细胞制备的M蛋白及L蛋白的抗原的预防用疫苗(Genhevac B Pasteur及Sci-B-Vac)也已市售(非专利文献3及4)。Genhevac B Pasteur的原料为将作为HBV表面抗原蛋白的M蛋白及S蛋白混合而得到的抗原，Sci-B-Vac的原料为包含L蛋白、M蛋白及S蛋白的抗原。

就利用了S抗原的预防疫苗而言，存在针对疫苗的非应答者、及防御效果起效(onset)慢是较大的课题。据报道，根据利用了仅由使用酵母制备的M蛋白组成的M抗原的预防用疫苗的临床成绩，Pre-S2区具有比S抗原更高的免疫原性，不仅产生针对S区的抗体，也产生针对Pre-S2区的抗体，因此对于减少不应答者或加快起效等而言是有效的(非专利文献5)。L抗原不仅具有M抗原所含有的S区及Pre-S2区，还具有作为HBV的感受器部的Pre-S1区。因此，将L抗原制成预防用疫苗的情况下，还可进一步产生针对呈递至最外部的Pre-S1区的抗体，因此，认为其是在减少非应答者及/或加快起效方面较之S抗原疫苗或M抗原疫苗而言更优异的预防用疫苗。

作为现有预防用疫苗的另一较大课题，存在针对逃逸突变体的HBV无效的问题。逃逸突变体是在S抗原的抗原性强的抗原决定簇“a”区中发生突变的HBV，就针对通常利用的S抗原疫苗产生的抗体而言，无法针对该突变体得到防御效果。可以设想，伴随着用于B型肝炎治疗的抗病毒药的普及，逃逸突变体会愈发增多，这一情况今后会成为更大的问题。