[发明专利]蛋白质表达构建体及其方法

权利要求书

1.编码融合蛋白的表达构建体，其中所述构建体包含

a)编码通式(I)的肽的第一核酸序列：

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀(SEQ ID NO:1)

其中X₁、X₅和X₁₀中的每一个为带负电荷的氨基酸或其功能变体，

其中X₂、X₃、X₄、X₆、X₇和X₉中的每一个为极性或非极性氨基酸或其功能变体，

其中X₈为带正电荷的或极性的氨基酸或其功能变体；

和

b)编码用于表达的蛋白质的第二核酸序列；

其中所述第一核酸序列与所述第二核酸序列邻接，从而使得由所述第一核酸序列编码的肽和由所述第二核酸序列编码的蛋白质形成融合蛋白；

其中相比于当由所述第一核酸序列编码的肽不存在时而言，由所述第一核酸序列编码的肽改善由所述第二核酸序列编码的蛋白质的表达。

2.根据权利要求1所述的表达构建体，其中：

i)X₁和X₅中的每一个为天冬氨酸或其功能变体，

ii)X₂为苏氨酸或其功能变体，

iii)X₃选自由天冬酰胺、苏氨酸和丝氨酸组成的组，或者为其功能变体，

iv)X₄选自由丝氨酸、苏氨酸和丙氨酸组成的组，或者为其功能变体，

v)X₆为异亮氨酸或其功能变体，

vi)X₇为丙氨酸或其功能变体，

vii)X₈选自由赖氨酸和天冬酰胺组成的组，或者为其功能变体，

viii)X₉为谷氨酰胺或其功能变体，并且

ix)X₁₀选自由天冬氨酸和谷氨酸组成的组，或者为其功能变体。

3.根据权利要求1所述的表达构建体，其中，由所述第一核酸序列编码的肽具有通式(Ia)：

D-T-X₃-X₄-D-I-A-X₈-Q-X₁₀(SEQ ID NO:25)

其中：

i)X₃选自由天冬酰胺、苏氨酸和丝氨酸组成的组，或者为其功能变体，

ii)X₄选自由丝氨酸、苏氨酸和丙氨酸组成的组，或者为其功能变体，

iii)X₈选自由赖氨酸和天冬酰胺组成的组，或者为其功能变体，并且

iv)X₁₀选自由天冬氨酸和谷氨酸组成的组，或者为其功能变体。

4.根据权利要求1所述的表达构建体，其中由所述第一核酸序列编码的肽与从由下列各项组成的组中选择的序列至少60％同一：

a)DTNSDIAKQD(SEQ ID NO:26)；

b)DTTTDIAKQE(SEQ ID NO:27)；和

c)DTSADIANQE(SEQ ID NO:28)。

5.根据权利要求1所述的表达构建体，其中由所述第一核酸序列编码的肽在pH 7下具有-2至-3的净负电荷。

6.根据权利要求1所述的表达构建体，其中由所述第二核酸序列编码的蛋白质为脯氨酰内肽酶(PEP)或硫氧还蛋白。