[发明专利]用于病毒检测的基于CRISPR效应系统的诊断

权利要求书

1.一种核酸检测系统，所述核酸检测系统包括：

CRISPR系统，所述CRISPR系统包含效应蛋白和一种或多种被设计成结合至相应靶分子的向导RNA；以及

基于RNA的掩蔽构建体；

其中所述靶分子包括一种或多种病毒靶分子。

2.一种多肽检测系统，所述多肽检测系统包括：

CRISPR系统，所述CRISPR系统包含效应蛋白和一种或多种被设计成结合至触发RNA的向导RNA；

基于RNA的掩蔽构建体；以及

一种或多种检测适体，所述一种或多种检测适体包含掩蔽的RNA聚合酶启动子结合位点或掩蔽的引物结合位点。

3.一种用于检测样品中的病毒的方法，所述方法包括：

将样品或样品组分配至一个或多个个别离散容积中，所述个别离散容积包含如权利要求1或2所述的CRISPR系统；

在足以允许所述一种或多种向导RNA结合至一种或多种靶分子的条件下孵育所述样品或样品组；

经由所述一种或多种向导RNA结合至所述一种或多种靶分子来活化所述CRISPR效应蛋白，其中活化所述CRISPR效应蛋白得以修饰所述基于RNA的掩蔽构建体以便产生可检测的阳性信号；以及

检测所述可检测的阳性信号，其中检测到所述可检测的阳性信号指示所述样品中一种或多种病毒的存在。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述样品包含两种或更多种病毒，并且其中所述方法区分所述两种或更多种病毒。

5.如权利要求3或4所述的方法，其中所述向导RNA检测所述一种或多种病毒的单核苷酸变体。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述向导RNA还包含一个或多个合成错配。

7.如权利要求3至5中任一项所述的方法，其中所述一种或多种CRISPR系统的所述向导RNA包含检测一组病毒中的每种病毒和/或病毒株的泛病毒向导RNA组。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述向导RNA是使用组覆盖方法得到。

9.一种用于检测病毒的方法，所述方法包括：

使如权利要求1或2中任一项所述的CRISPR系统暴露于样品；

经由所述一种或多种向导RNA结合至所述一种或多种微生物特异性靶RNA或所述一种或多种触发RNA来活化所述RNA效应蛋白以便产生可检测的阳性信号；以及

检测所述可检测的阳性信号，其中检测到所述可检测的阳性信号指示所述样品中一种或多种病毒的存在。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述CRISPR系统在衬底上，并且其中使所述衬底暴露于所述样品。

11.如权利要求10所述的方法，其中将相同或不同CRISPR系统施加至所述衬底上的多个离散位置。

12.如权利要求11所述的方法，其中将相同或不同CRISPR系统施加至所述衬底上的多个离散位置。

13.如权利要求10至12中任一项所述的方法，其中所述衬底是柔性材料衬底。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述柔性材料衬底是纸衬底、织物衬底或基于柔性聚合物的衬底。

15.如权利要求12所述的方法，其中所述不同CRISPR系统检测每个位置处的不同微生物。

16.如权利要求13所述的方法，其中通过将所述衬底短暂浸入有待取样的流体中，通过将有待测试的流体施加至所述衬底，或通过使有待测试的表面与所述衬底接触，使所述衬底被动暴露于所述样品。