[发明专利]新型CAS13B直向同源物CRISPR酶和系统

权利要求书

1.一种非天然存在的或经工程化的组合物，其包含：

i)来自表1A的Cas13b效应蛋白，和

ii)crRNA，

其中所述crRNA包含a)引导序列，其能够杂交至靶RNA序列，和b)正向重复序列，

从而形成包含与杂交至所述靶RNA序列的所述引导序列复合的所述Cas13b效应蛋白的CRISPR复合物。

2.如权利要求1所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其包含增强Cas13b效应蛋白活性的辅助蛋白。

3.如权利要求2所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述增强Cas13b效应蛋白活性的辅助蛋白是csx28蛋白。

4.如权利要求1所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其包含阻遏Cas13b效应蛋白活性的辅助蛋白。

5.如权利要求4所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述阻遏Cas13b效应蛋白活性的辅助蛋白是csx27蛋白。

6.如权利要求1至5中任一项所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其包含两种或多种crRNA。

7.如权利要求1所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述引导序列杂交至原核细胞中的靶RNA序列。

8.如权利要求1所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述引导序列杂交至真核细胞中的靶RNA序列。

9.如权利要求1所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述Cas13b效应蛋白包含一个或多个核定位信号(NLS)。

10.如权利要求1所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述Cas13b效应蛋白与一个或多个功能结构域缔合。

11.如权利要求10所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述功能结构域切割所述靶RNA序列。

12.如权利要求10所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述功能结构域修饰所述靶RNA序列的转录或翻译。

13.如权利要求1所述的组合物，其中所述Cas13b效应蛋白与一个或多个功能结构域缔合；和所述效应蛋白含有在HEPN结构域内的一种或多种突变，从而所述复合物可递送表观遗传修饰剂或转录或翻译激活或阻遏信号。

14.如权利要求2或4所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述Cas13b效应蛋白和所述辅助蛋白来自相同的生物体。

15.如权利要求2或4所述的非天然存在的或经工程化的组合物，其中所述Cas13b效应蛋白和所述辅助蛋白来自不同的生物体。

16.一种用于提供如权利要求1所述的组合物的Cas13b载体系统，其包含一种或多种载体，所述载体包含：

第一调控元件，其可操作地连接至编码来自表1A的Cas13b效应蛋白的核苷酸序列，和

第二调控元件，其可操作地连接至编码crRNA的核苷酸序列。

17.如权利要求16所述的载体系统，其还包含：可操作地连接至辅助蛋白的核苷酸序列的调控元件。

18.如权利要求16所述的载体系统，其中编码所述Cas13b效应蛋白的核苷酸序列经密码子优化以在真核细胞中表达。

19.如权利要求17所述的载体系统，其中编码所述Cas13b效应蛋白和所述辅助蛋白的核苷酸序列经密码子优化以在真核细胞中表达。