[发明专利]电压门控钙通道缺陷亚基α2δ及其应用

说明书

所述电压选通的钙通道辅助亚基α2δ‑1是已知发挥治疗作用的加巴喷丁类化合物的靶标/受体，例如癫痫和神经性疼痛。已知加巴喷丁类通过结合精氨酸发挥其作用(R)在位于α2δ‑1的N端的RRR基序内。本发明描述了一种新的加巴喷丁类结合位点，其位于vgcc_a2结构域内和α2δ‑1的IKAK氨基酸序列内。这种新鉴定的氨基酸结合位点可用于在神经性疼痛中和在其中参与α2δ‑1的其它病症和病症中具有治疗性的新化合物的鉴定和表征中的用途。

技术领域

本发明涉及本发明涉及电压门控钙通道(VGCCs)，特别是但不限于，位于电压选通钙通道的α2δ-1亚基内的新肽，其形成结合位点，例如用于加巴喷丁类。本发明还涉及包含所述分离的肽的测试系统，以及鉴定与所述肽结合的试剂的方法本发明还包括制备所述肽的方法，使用所述肽鉴定的试剂，能够与所述分离的肽结合的抗体，表达所述肽的突变版本的动物及其用途

本发明的背景技术

电压选通的钙(□)通道是用于可兴奋细胞中的许多关键功能的必需成分，包括神经递质释放和肌肉收缩。发现α1亚基与钙通道阻断剂结合，鉴定为成孔通道亚基。β和α2δ亚单元然后被称为辅助子单元或辅助子单元[1]

已经鉴定了四个α2δ亚基基因。cacna 2 d 1编码α2δ-1，首先在骨骼肌中识别该α2δ-1。本发明公开了一种治疗心脑血管疾病的药物及其制备方法，属于药物技术领域。编码α2δ-2和α2δ-3的cacna 2 d 2和cacna 2 d 3基因在神经元和一些其它组织[2]中有差异表达。cacna 2 d 4，编码α2δ-4，表现出主要非神经元[3]的表达

α2δ-1亚基含有一定的结构域，包括Von Willebrand因子a(VWF-a或VWA)领域，已知结合多个细胞粘附和细胞外基质蛋白(SEQ ID NO.1)。VWA域参与蛋白质-蛋白质相互作用，通过它们的金属离子依赖性粘合位点(MIDAS)motif。在α2δ亚单元中还存在两个细菌化学感应样或超高速缓冲结构域，位于VWA域[4]的下游

VWA_N和VWF-A域的近似位置，两个细菌化学感应域(cachel 1和cacheh 2)和电压门控钙通道α2域(VGCC_α2)如图1所示

α2δ亚基及其结合配体已被认为是神经性疼痛中的治疗靶，在癫痫症[1，5，10]和多种疾病和病症中包括下泌尿道症状，阻塞性肺病

(WO 2004054577 A1)，性功能障碍和kawakai疾病

此外，敲除小鼠中α2δ-1亚基的靶向破坏不是致命的，这些动物缺乏高亲和力加巴喷丁结合位点，证明了显著降低的基础心肌收缩力和松弛以及减小的L型Ca当前峰值电流幅值[9]

α2δ-1亚基也与癌症[16，WO 2012/113266]中的治疗目标以及突触生成[17，US2011104181 a 1]的调制有关

建立了α2δ-1在与神经损伤(神经性疼痛)[1，5]相关的慢性疼痛的发展中起到中枢作用。实验外周神经损伤导致受损的感觉神经元(三叉神经元和DRGs)中的升高的α2δ-1mRNA水平)中α2δ-1蛋白的相应增加以及脊髓[6，7]中的α2δ-1蛋白的相应增加

进一步利用转基因动物(小鼠)模型研究了α2δ-1亚基在疼痛中的作用。已经表明，在转基因小鼠中仅在神经元组织中过度表达α2δ-1已经揭示了痛觉过敏和触觉异常性异常的损伤无关的神经性表型。这清楚地建立了α2δ-1作为参与神经性疼痛表型[8]的开发的亚单位Naiveα2δ-1_/_小鼠表现出了显著的机械和冷敏感性的行为缺陷，所述方法包括以下步骤：a)将所述a组分与b组分混合；b)将所述第一组分和所述第二组分的至少一种。本发明提供了一种低机械灵敏度，低机械灵敏度，低机械灵敏度，高灵敏度，高灵敏度，高灵敏度，高灵敏度，高灵敏度，高灵敏度，高灵敏度，高灵敏度，