[发明专利]李斯特氏菌属检测用培养基

说明书

本发明提供一种简易且特异性地检测单核细胞增生李斯特氏菌和/或伊氏李斯特氏菌的手段。一种单核细胞增生李斯特氏菌和/或伊氏李斯特氏菌检测用培养基，其含有以下的成分(A)、(B)及(C)：(A)通过用β‑葡萄糖苷酶进行分解而显色的显色性物质或发出荧光的荧光原性物质；(B)通过用磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C进行分解而显色的显色性物质或发出荧光的荧光原性物质；及(C)糖。

技术领域

本发明涉及用于简易且特异性地检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)及伊氏李斯特氏菌(Listeria ivanovii)的培养基及检测方法。

背景技术

属于李斯特氏菌(Listeria)属的细菌为革兰氏阳性、兼性厌氧性的非芽胞短杆菌。目前，存在有单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria(以下，简写作L.)monocytogenes)、伊氏李斯特氏菌(L.ivanovii)、英诺克李斯特氏菌(L.innocua)、威尔斯李斯特氏菌(L.welshimeri)、西尔李斯特氏菌(L.seeligeri)、格氏李斯特氏菌(L.grayi)、莫氏李斯特氏菌(L.marthii)、Rocour李斯特氏菌(L.rocourtiae)、弗氏李斯特氏菌(L.fleischmannii)、维森李斯特氏菌(L.weihenstephanensis)、水李斯特氏菌(L.aquatica)、康奈尔李斯特氏菌(L.cornellensis)、佛罗里达李斯特氏菌(L.floridensis)、L.grandensis及河岸李斯特氏菌(L.riparia)等。其中，通常对人表现出病原性的细菌仅为单核细胞增生李斯特氏菌，在食品检查中将本细菌作为检查对象。然而，食品被以英诺克李斯特氏菌为首的数种除单核细胞增生李斯特氏菌以外的李斯特氏菌属细菌污染的情况较多，因此与这些细菌的区分变得重要(非专利文献1)。此外，已知单核细胞增生李斯特氏菌引起人畜共患疾病，在美国是作为环境检查的对象的细菌。

日本的李斯特氏菌属的标准试验方法中有定性试验与定量试验。在定性试验中，将样本在half-Fraser液体培养基中进行一次增殖培养，进一步使用Fraser液体培养基进行二次增殖培养，使用含有酶底物的选择分离培养基(酶底物培养基)，分离李斯特氏菌属。此时，还同时进行以下方法：不进行二次增菌培养，将在一次增菌培养中得到的菌落接种于酶底物培养基的方法。另一方面，在定量试验中，利用BPW培养基进行复苏培养(20±2℃，1小时±5分钟)后，使用酶底物培养基，分离李斯特氏菌属。作为在定性方法及定量方法的使用了酶底物培养基的培养后，确定单核细胞增生李斯特氏菌的方法，已知有碳水化合物代谢试验及CAMP试验等，但由于需要培养，因此确定需要时间。由此，作为单核细胞增生李斯特氏菌的辅助确认方法，已知有PCR法、使用了免疫诊断学方法的迅速诊断法(非专利文献1)。例如，作为属于李斯特氏菌属的菌种的鉴别手段，已知一种基于作为PCR法的一种的LAMP法的检测法(专利文献1)。然而，该LAMP法为使用4种菌种特异性引物的方法，不是能够在日常的检查室中采用的手段。

作为属于李斯特氏菌属的菌种的鉴别手段，如上所述，使用选择分离培养基的手段较为简便。作为这样的选择分离培养基，已知有：使用了用β-葡萄糖苷酶进行分解而显色的显色性物质的ALOA(注册商标)琼脂培养基(Sysmex-biomerieux Japan Ltd.)、CHROMagar(注册商标)Listeria(CHROMagar公司)。将单核细胞增生李斯特氏菌接种于所述酶底物培养基时，显现出伴随乳白色晕圈的蓝绿色的典型菌落，除此以外的李斯特氏菌属则不产生晕圈。同样地，作为使用了用β-葡萄糖苷酶进行分解而显色的显色性物质的培养基，已知有专利文献2。此外，已知一种含有用磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PIPL C)进行了特异性剪切的显色底物的培养基(专利文献3)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2007-61061号公报

专利文献2：日本特开2012-130274号公报