[发明专利]用于产生生物工程化的神经元类器官(BENO)的方法及其用途在审
| 申请号： | 201880038743.4 | 申请日： | 2018-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN110741078A | 公开（公告）日： | 2020-01-31 |
| 发明（设计）人： | W-H·齐默尔曼;M·P·扎菲里奥 | 申请（专利权）人： | 乔治-奥古斯特-哥廷根大学公共利益基金会 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079;C12N5/071;C12N5/00;G01N33/50;C12N5/0793 |
| 代理公司： | 11314 北京戈程知识产权代理有限公司 | 代理人： | 程伟;程云 |
| 地址： | 德国*** | 国省代码： | 德国;DE |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 神经组织 神经元 细胞培养模型 个性化药物 神经元网络 生物工程化 药物筛选 体外 大脑 器官 应用 开发 | ||
1.一种从多能干细胞(PSC)生产生物工程化的神经元类器官(BENO)的方法，该方法包括：
(A)提供PSC来源；
(B)培养步骤(A)的PSC，其包埋在浸没在细胞培养介质中的基质中；
(C)在包含Rho相关激酶抑制剂(ROCKi)和FGF-2的细胞培养介质中，培养步骤(B)的所述基质中的PSC；
(D)在包含视黄酸和一种或多种SMAD信号传导抑制剂的细胞培养介质中，培养源自步骤(C)的PSC和基质的形成的BENO，以诱导神经发生；
(E)在包含TGF-β和FGF-2的细胞培养介质中培养步骤(D)形成的BENO，以增强基质细胞的发生和神经发生；
(F)在包含TGF-β和一种或多种notch信号传导抑制剂的细胞培养介质中，培养步骤(E)形成的BENO，以增强基质细胞的发生和神经分化。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述基质不包含Matrigel。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述基质不包含Matrigel或具有不确定组分的天然来源的其他成分。
4.根据权利要求1-3所述的方法，其中所述基质包含胶原蛋白，优选I型胶原蛋白。
5.根据权利要求1-4所述的方法，其中在3D环境内产生BENO，优选其中所述3D环境由基质限定。
6.根据权利要求1-5所述的方法，其中所述基质细胞包含神经胶质细胞。
7.根据权利要求1-6所述的方法，其中步骤(D)的介质包含至少两种SMAD信号传导抑制剂，优选其中SMAD信号传导抑制剂包括头蛋白和SB 431542。
8.根据权利要求1-7所述的方法，其中步骤F的notch信号传导抑制剂是DAPT。
9.根据权利要求1至8所述的方法，其中所述PSC是人PSC。
10.根据权利要求1-9所述的方法，
其中步骤(A)和步骤(B)在第-1天进行，
其中步骤(C)在第-1天到第0天进行，
其中步骤(D)在第0天到第10天进行，
其中步骤(E)在第10天到第15天进行，
其中步骤(F)在第15天到至少第28天进行。
11.一种神经元类器官，其特征在于所述神经元类器官的神经元细胞被组织在功能性神经元网络中。
12.一种生物工程化的神经元类器官(BENO)，其是通过权利要求1-11的所述方法生产的。
13.根据权利要求11或12的BENO用作疾病和/或药物筛选模型的用途。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述BENO与其他组织工程化平台共培养。
15.一种用于进行权利要求1-9所述的方法的试剂盒。
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