[发明专利]多特异性抗体及其制备和使用方法

说明书

本公开提供了具有N‑末端和C‑末端的四特异性抗体单体，其从N‑末端到C‑末端依次包含在N‑末端的第一scFv结构域、第二scFv结构域、Fab结构域、Fc结构域和在C‑末端的第三scFv，其中第一scFv结构域、第二scFv结构域、Fab结构域、和第三scFv结构域各自具有针对不同抗原的结合特异性。在一个实施方案中，抗原是肿瘤抗原、免疫信号抗原或其组合。在一个实施方案中，抗原包括CD19、CD3、CD137、4‑1BB和PD‑L1。还提供了包含所公开的四特异性抗体的多特异性抗体。

相关申请的交叉引用

本申请主张2017年6月25日提交的美国临时专利申请No.62524558的权益，该申请通过引用以其整体明确地并入本文。

技术领域

本公开一般涉及生物治疗技术领域，且更具体地涉及制备和使用多特异性抗体。

背景技术

癌细胞发展各种策略以逃避免疫系统。免疫逃逸的潜在机制之一是免疫系统对癌细胞的识别降低。癌症特异性抗原的缺陷呈递或其缺乏导致免疫耐受和癌症进展。在有效的免疫识别的存在下，肿瘤使用其它机制以避免被免疫系统消除。免疫活性肿瘤产生抑制性微环境以下调免疫应答。多个参与者参与形成抑制性肿瘤微环境，包括肿瘤细胞、调节性T细胞、髓样衍生的抑制性细胞、基质细胞和其它细胞类型。通过从局部环境中分泌免疫抑制性细胞因子或消除必需的存活因子，免疫应答的抑制可以以细胞接触依赖性形式以及以接触非依赖性方式进行。细胞接触依赖性抑制依赖于细胞表面上表达的分子，例如，程序性死亡配体1(PD-L1)、T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)等[Dunn等，2004，免疫(Immunity)，21(2)：137-48；Adachi&Tamada，2015，癌症科学(Cancer Sci.)，106(8)：945-50]。

随着肿瘤逃避免疫系统识别的机制继续被更好地了解，最近出现了靶向这些机制的新治疗方式。2011年3月25日，美国食品和药品管理局(FDA)批准了用于治疗不可切除或转移性黑素瘤的易普利姆玛单抗注射剂(Yervoy，Bristol-Myers Squibb)。Yrevoy与活化T细胞上表达的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)结合并阻断抗原呈递细胞上CTLA-4与CD80/86的相互作用，从而阻断通过CTLA-4递送到T细胞中的阴性或抑制性信号，导致抗原特异性T细胞的再活化，这在许多患者中导致肿瘤的根除。2014年几年后，FDA批准Keytruda(派姆单抗(Pembrolizumab)，默克公司)和Opdivo(纳武单抗(Nivolumab)，百时美施贵宝)用于治疗晚期黑素瘤。这些单克隆抗体结合在活化和/或耗尽的T细胞上表达的PD-1，并阻断PD-1与在肿瘤上表达的PD-L1的相互作用，从而消除通过PD-1进入T细胞的抑制信号，导致抗原特异性T细胞的再活化，这在许多患者中再次导致肿瘤的根除。从那时起，已经进行了另外的临床试验，将单一单克隆抗体Yervoy与单克隆抗体Yervoy和Opdivo的组合在晚期黑素瘤的治疗中进行比较，晚期黑素瘤在用抗体组合治疗的患者中显示出总体存活和无进展存活的改善。(Hodi等人，2016，柳叶刀·肿瘤学(Lancet Oncol).17(11):1558-1568，Hellman等人，2018，肿瘤细胞(Cancer Cell)33(5)：853-861)。然而，由于许多临床试验已经显示出使用对一种或多种免疫检查点分子具有特异性的单克隆抗体治疗癌症患者的极大益处，数据已经显示出只有那些具有产生被抗原特异性T细胞识别的新T细胞表位的高突变负荷的患者显示出临床应答(Snyder等人，2014，NEJM371：2189-2199)。具有低肿瘤突变负荷的那些患者大部分不显示客观的临床反应(Snyder等人，2014，NEJM371：2189-2199，Hellman等人，2018，肿瘤细胞(Cancer Cell)33(5)：853-861)。