[发明专利]改变电场的电泳方法

说明书

本发明提供了一种用于检测一样品中一分析物的电泳方法，所述方法包括提供所述样品以及与所述分析物特异性结合的一试剂，所述样品与所述试剂在一分离通道中的一流体介质中相结合；沿着所述分离通道施加一电场，所述电场具有一电场分布，从而引起结合的及未结合的分析物及/或试剂相对于所述流体移动；改变所述施加的电场以相对于所述分离通道调整所述电场分布，从而使得所述结合的分析物及所述未结合的分析物在由于所述电场产生的一电力以及由于所述流体产生的一流体动力的结合影响下在所述流体中彼此隔开的位置处浓缩。

技术领域

本发明涉及用于检测一样品中的一分析物的多种电泳方法。

背景技术

电泳技术是众所周知的，并用于根据其电及流体动力学特性来分离物体。其他分离技术包括使用EP1455949中所述的离心光谱仪。

在常规电泳中，施加一恒定且均匀的电场以使物体移动通过一流体或一筛分介质。当物体在材料中移动时，它们承受取决于其形状及大小(例如：流体动力)及/或取决于它们对材料的亲和力(例如：化学吸引力/排斥力)的力，以及由于施加的电场而产生的取决于它们的视在电荷一电场力。由于每个物体类型承受的力不同，物体根据其各自的特性以不同的终端速度移动，因此它们分成“带”。

目前用于检测一样品中分析物的电泳方法，例如蛋白质转渍法(有时称为蛋白质免疫印迹法)，缓慢且费时，涉及使用多种不同的化学物质及缓冲液进行大量样品制备，并且倾向于仅指示一分析物的存在，以及有关其大小及/或电荷性质的基本信息。在蛋白质转渍法中，进行凝胶电泳(通常使用聚丙烯酰胺凝胶)以按其大小将变性蛋白质分离出来(或按其三维结构的天然蛋白质)。凝胶及样品缓冲液通常包含十二烷基硫酸钠，以使样品中的所有蛋白质具有均匀的负电荷，其有助于电泳。这被称为十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)。在凝胶上分离之前，通常将蛋白质样品煮沸以使存在的蛋白质变性。在电泳凝胶上分离后，将蛋白质印迹至一膜上(通常使用硝化纤维素或聚偏二氟乙烯)。然后使用蛋白质溶液(例如：牛奶)封闭膜上未被占据的结合位点，以防止下一阶段中的非特异性抗体结合。洗涤膜，然后将所述膜与特异性结合至目标蛋白的抗体一起温育。然后，通常进行进一步的洗涤步骤以及使用识别第一抗体并附着于一可检测标签的一抗体的抗体温育步骤以增强信号。由于第一抗体不需要标记，因此这也简化了试剂并降低了试剂成本。然后检测可检测的部分(通常是³²P或可以通过切割受质引起颜色变化来被检测的酶)，以提供最终结果：通常是在近似大小的条件下分辨率较差(使用在凝胶上同步制备的大小蛋白质标志样品来计算)。若没有电泳步骤，则可能会有大量的抗体交叉反应，这将使所述测定相对无效。

如上所述，在准备用于蛋白质转渍的样品时，蛋白质经常会变性，因此会失去蛋白质的天然构型。这具有需要使用针对线性表位(抗体识别的结合位点)的结合剂(抗体)的缺点。此类针对线性表位的抗体的范围及研究诊断价值可能受到更大的限制。因此，例如，通过免疫产生的针对天然蛋白质的抗体可能不适用于许多蛋白质的蛋白质转渍。此外，所需的大量步骤及试剂意味着完成蛋白质转渍可能要花费数小时，并且结果可能会变化很大。蛋白质样品所经历的苛刻过程也可能破坏其结构的其他方面，这些方面可能具有研究或诊断价值，例如翻译后修饰(例如糖基化位点)。

其他相关的免疫测定(使用抗体的测定)技术包括斑点杂交分析、定量斑点杂交、免疫组织化学、免疫细胞化学(其中抗体用于通过免疫染色检测组织及细胞中的蛋白质)及酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。