[发明专利]快速印迹装置及其应用

说明书

一种湿蛋白质印迹系统，其包括：(a)干式组装模块；(b)蛋白质印迹腔室；(c)液体转移缓冲液处理系统；以及(d)控制面板和电源。所述湿蛋白质印迹系统减少了传统湿印迹过程的印迹时间，同时保持了蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到膜的高灵敏度的能力。所述干式组装模块和液体转移缓冲液处理系统使得全自动缓冲液操作系统得以实现。所述转移缓冲液可被泵送到所述蛋白质印迹腔室中以提高转移效率。所述蛋白质印迹腔室使得控制所述湿蛋白质印迹系统的温度成为可能。

技术领域

本发明涉及生物技术领域。具体地，本发明涉及用于蛋白质和核酸的湿印迹的装置和应用。

背景技术

生物大分子的印记(impriting)或印迹(blotting)是一种综合技术，所述技术整合了凝胶电泳分离、靶标在膜上的固定以及分子识别和可视化，其核心是将分离的生物大分子从电泳凝胶转移到固定的纸或膜上。

第一种生物大分子印迹方法是由1975年苏格兰爱丁堡大学的Edwin MellorSouthern教授发明的。通过内切核酸酶将高分子量DNA链切割成小片段，将这些小片段在琼脂糖凝胶上进行电泳以按大小分离。将含醋酸纤维的纸置于琼脂糖凝胶上，并在毛细效应下将DNA片段转移到纸上并将其固定在纸上，并用杂合寡核苷酸显现DNA片段。为了纪念Edwin Mellor Southern爵士，这种DNA分析方法被命名为Southern-Blot。此外，用于RNA分析的相同方法被命名为Northern-Blot。

在1979年，来自Friedrich Miescher研究所的Harry Towbin通过应用电场辅助印迹来利用类似的技术用于蛋白质抗原检测，并将其命名为免疫印迹法。1981年，W.NealBurnette正式引入“Western-Blot”作为检测蛋白质的方法。

传统的蛋白质印迹法/蛋白免疫印迹法包括以下步骤：1)用SDS-PAGE电泳分离蛋白质；2)将蛋白质转移到膜，通常是NC或PVDF膜；3)抗体孵育(一抗和/或二抗)；4)可视化。

在此过程中，步骤2复杂且高度依赖技能。为了组装转移三明治，操作员通常需要按顺序放置以下内容：1)阳极板；2)海绵；3)3层滤纸；4)带有分离蛋白质的电泳聚丙烯酰胺凝胶；5)NC或PFDV转移膜；6)另外3层滤纸；7)另一块海绵；8)阴极板。

为了确保每层的紧密接触，每个步骤都需要除去气泡，并且所有相关的滤纸或垫需要预湿，这通常在膜-凝胶组装期间引起误差。传统的湿转移过程使用大量的印迹缓冲液来确保缓冲容量并使转移过程保持在相对较低的温度，这限制了高电压电位的使用。因此，为了获得更好的转移结果，通常建议传统的湿转移过程进行60至90分钟。

为了缩短转移时间，最方便的方式是施加更高的电压电位。为了避免产生过多的热量，调整印迹系统以减少缓冲液并使电极之间的距离更短。因此，发明了半干印迹系统或干印迹系统以在不到10分钟内完成印迹。这些新系统缩短了转移时间，但同时也牺牲了印迹的效率，特别是对于较高分子量的蛋白质，因此，这提出了一个新问题——高分子量蛋白质和低分子量蛋白质的转移是不均匀的。例如，超过100KDa的蛋白质不能有效转移，而10KD蛋白质转移良好，或者，超过100KDa的蛋白质转移充分，而10KDa蛋白质过度转移并且不能在膜上检测到。另外，对于半干印迹系统或干印迹系统，膜和凝胶的组装仍然是复杂的操作。总体而言，半干印迹系统或干印迹系统具有有限的转移效率。因此，当需要更高的效率时，本领域技术人员被迫重新使用传统的湿印迹系统以获得更好的印迹结果。

因此，本领域需要一种蛋白质印迹系统，所述蛋白质印迹系统具有高效率并且产生一致且均匀的蛋白质转移，如传统的湿转移蛋白质印迹系统所提供的，并且除此之外，蛋白质印迹系统具有高的蛋白质转移能力使得蛋白质从凝胶到膜的转移在15分钟内完成，如快速半干蛋白质印迹系统或干蛋白质印迹系统所提供的。

发明内容

本文提供了一种新型快速的湿印迹装置，所述湿印迹装置结合了传统湿转移蛋白质印迹系统和快速半干蛋白质印迹系统的优点。