[发明专利]利用CRISPR-Cpf1的可诱导、可调和多重的人类基因调节在审

专利信息
申请号: 201880041218.8 申请日: 2018-04-23
公开(公告)号: CN110799205A 公开(公告)日: 2020-02-14
发明(设计)人: Y·G·泰克;B·克莱因斯蒂弗;J·K·乔昂格 申请(专利权)人: 通用医疗公司
主分类号: A61K38/05 分类号: A61K38/05;C07K14/05;C12N15/62;C12N15/67
代理公司: 11277 北京林达刘知识产权代理事务所(普通合伙) 代理人: 刘新宇;李茂家
地址: 美国马*** 国省代码: 美国;US
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摘要:
搜索关键词: 弗朗西斯氏菌 规律间隔 多重化 激活子 可调和 成簇 菌属 诱导 重复
【权利要求书】:

1.一种融合蛋白,其包含与至少一个激活结构域融合的无催化活性的毛螺旋菌科细菌ND2006蛋白Cpf1(dLbCpf1),优选地其中所述激活结构域是包含四个拷贝的VP16、人类NF-KB p65激活结构域和Epstein-Barr病毒R反式激活子(Rta)的合成的VPR激活子。

2.一种融合蛋白,其包含与条件性二聚化结构域融合的无催化活性的毛螺旋菌科细菌ND2006 Cpf1(dLbCpf1),并具有任选的间插接头。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白,其中所述条件性二聚化结构域是DmrA或DmrC。

4.一种组合物,其包含根据权利要求2所述的融合蛋白和第二融合蛋白,所述第二融合蛋白包含与第二条件性二聚化结构域融合的至少一个激活结构域,在每个激活结构域和/或第二二聚化结构域之间具有任选的间插接头,所述第二条件性二聚化结构域在二聚剂的存在下与权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化进行二聚。

5.根据权利要求4所述的组合物,其中(i)权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化是DmrA,所述第二条件性二聚化结构域是DmrC,或(ii)权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化是DmrC,所述第二条件性二聚化结构域是DmrA。

6.根据权利要求4所述的组合物,其中所述激活结构域是VP64、Rta、NF-κB p65或VPR。

7.一种核酸,其编码根据权利要求1至3任一项所述的融合蛋白。

8.一种试剂盒,其包含编码权利要求2所述的融合蛋白以及第二融合蛋白的核酸,所述第二融合蛋白包含与第二条件性二聚化结构域融合的激活结构域,在激活结构域和第二二聚化结构域之间具有任选的间插接头,所述第二条件性二聚化结构域在二聚剂的存在下与权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化进行二聚。

9.根据权利要求8所述的试剂盒,其中(i)权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化是DmrA,所述第二条件性二聚化结构域是DmrC,或(ii)权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化是DmrC,所述第二条件性二聚化结构域是DmrA。

10.一种细胞,其表达根据权利要求1-3任一项所述的融合蛋白。

11.一种细胞,其表达根据权利要求2所述的融合蛋白和第二融合蛋白,所述第二融合蛋白包含与第二条件性二聚化结构域融合的激活结构域,所述第二条件性二聚化结构域在二聚剂的存在下与权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化进行二聚。

12.根据权利要求11所述的细胞,其中(i)权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化是DmrA,所述第二条件性二聚化结构域是DmrC,或(ii)权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化是DmrC,所述第二条件性二聚化结构域是DmrA。

13.一种提高细胞中目标基因的表达的方法,所述方法包括使所述细胞接触、或在所述细胞中表达以下中的一种或多种:

(i)权利要求1所述的融合蛋白,和将所述融合蛋白导向所述目标基因的调节区的至少一种crRNA;

(ii)权利要求2所述的融合蛋白;和包含与第二条件性二聚化结构域融合的激活结构域的第二融合蛋白,在激活结构域和第二二聚化结构域之间具有任选的间插接头,所述第二条件性二聚化结构域在二聚剂的存在下与权利要求2所述的融合蛋白中的条件性二聚化进行二聚;以及将所述融合蛋白导向所述目标基因的调节区的至少一种crRNA。

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