[发明专利]产生基因修改的动物的方法

权利要求书

1.一种自胚胎发育的猪，其中所述胚胎包含具有至少75％的失活的猪内源性逆转录病毒(PERV)部分的猪细胞。

2.根据权利要求1所述的猪，其中所述细胞中约100％的所述PERV部分均为失活的。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的猪，其中所述PERV部分包含一种或多种导致PERV部分活性降低或丧失的突变或表观遗传变化。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的猪，其中所述猪细胞的所述PERV部分已经通过以下方法失活，所述方法包括：向所述细胞施用针对参与PERV复制和/或装配的基因的基因组修改试剂，其中所述试剂破坏所述基因的转录和/或翻译。

5.根据权利要求4所述的猪，其中所述试剂是核酸酶或切口酶或编码所述核酸酶或切口酶的核酸。

6.根据权利要求4所述的猪，其中所述核酸酶或切口酶是CRISPR相关的核酸酶或切口酶。

7.根据权利要求4-6中任一项所述的猪，其中所述试剂还包含：

a)CRISPR向导RNA或tracrRNA或；

b)编码所述CRISPR向导RNA的核酸。

8.根据权利要求7所述的猪，其中所述CRISPR向导RNA包含SEQ ID NO：1-3或26-181中任一核苷酸序列，其任何品系特异性遗传变体，或其任何组合。

9.根据权利要求7所述的猪，其中所述CRISPR向导RNA包含SEQ ID NO：1-3或26-116中任一核苷酸序列，其任何品系特异性遗传变体，或其任何组合。

10.根据权利要求7所述的猪，其中所述CRISPR向导RNA包含SEQ ID NO：35，36，48，99，101，102，106，108，111，113中任一核苷酸序列，或其任何组合。

11.根据权利要求4-7中任一项所述的猪，其中所述试剂是编码CRISPR-Cas9核酸酶或切口酶的核酸，其中所述细胞经设计以稳定地表达所述试剂，其中所述试剂还包含至少一种向导RNA，并且其中至少一个向导RNA序列包含SEQ ID NO：1-3或26-116中任一核苷酸序列。

12.根据在前的任一权利要求所述的猪，其中所述猪在妊娠后至少1个月，至少6个月，至少1年，至少5年，至少10年保持相同或基本相同的PERV失活水平。

13.一种自在前的任一权利要求所述的猪获取的器官或组织。

14.一种产生猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪的方法，包括：

i.获取具有细胞核的核供体细胞，其中所述核供体细胞中至少75％的所述PERV部分是失活的；

ii.将所述核供体细胞的所述细胞核转移至受体去核卵母细胞中以产生核转移的卵母细胞；

iii.使所述核转移的卵母细胞活化；

iv.培养所述核转移的卵母细胞以产生胚泡或胚胎；

v.将所述胚泡或胚胎转移至代孕体中；以及

vi.从所述胚泡或胚胎中产生活体PERV失活的猪。

15.一种产生猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪的方法，包括：

i.使用来自核供体细胞的细胞核产生胚泡或胚胎，其中所述核供体细胞中至少75％的所述PERV部分是失活的；以及

ii.将所述胚泡或胚胎转移至代孕体中以产生PERV失活的猪。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述核供体细胞是胎儿细胞。