[发明专利]高纯度甜菊醇糖苷

权利要求书

1.一种生产高度纯化的目标甜菊醇糖苷的方法，其包括以下步骤：

a.提供包含具有至少一个碳原子的有机化合物的起始组合物；

b.提供酶制剂或微生物，其包含选自甜菊醇生物合成酶、UDP-糖基转移酶和任选地UDP-葡萄糖再循环酶的至少一种酶；

c.使所述酶制剂或微生物与含有所述起始组合物的培养基接触以产生包含至少一种目标甜菊醇糖苷的培养基。

2.一种用于生产高度纯化的目标甜菊醇糖苷的方法，其包括以下步骤：

a.提供包含具有至少一个碳原子的有机化合物的起始组合物；

b.提供生物催化剂，其包含选自甜菊醇生物合成酶、UDP-糖基转移酶和任选地UDP-葡萄糖循环酶的至少一种酶；

c.使所述生物催化剂与包含所述起始组合物的培养基接触以产生包含至少一种目标甜菊醇糖苷的培养基。

3.权利要求1或2的方法，其还包括以下步骤：

d.从所述培养基中分离所述目标甜菊醇糖苷以提供高度纯化的目标甜菊醇糖苷组合物。

4.权利要求1或2所述的方法，其中所述起始组合物选自甜菊醇、甜菊醇糖苷、多元醇、碳水化合物及其组合。

5.权利要求1的方法，其中所述微生物选自大肠杆菌(E.coli)、酵母属的种(Saccharomyces sp.)、曲霉属的种(Aspergillus sp.)、毕赤酵母属的种(Pichia sp.)、芽孢杆菌属的种(Bacillus sp.)和耶氏酵母属的种(Yarrowia sp.)。

6.权利要求2的方法，其中所述生物催化剂是酶或包含一种或多种酶的细胞，其能够将所述起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷。

7.权利要求1或2的方法，其中所述目标甜菊醇糖苷选自reb M、reb D、rebI和/或reb E及其混合物。

8.权利要求1或2的方法，其中所述酶选自甲羟戊酸(MVA)途径酶、2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径(MEP/DOXP)酶、牻牛儿牻牛儿基二磷酸合酶、柯巴基二磷酸合酶、贝壳杉烯合酶、贝壳杉烯氧化酶、贝壳杉烯酸13-羟化酶(KAH)、甜菊醇合成酶、脱氧木酮糖5-磷酸合酶(DXS)、D-1-脱氧木酮糖5-磷酸还原异构酶(DXR)、4-二磷酸胞嘧啶基-2-C-甲基-D-赤藓糖醇合酶(CMS)、4-二磷酸胞嘧啶基-2-C-甲基-D-赤藓糖醇激酶(CMK)、4-二磷酸胞嘧啶基-2-C-甲基-D-赤藓糖醇2,4-环二磷酸合酶(MCS)、1-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-二磷酸合酶(HDS)、1-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-二磷酸还原酶(HDR)、乙酰乙酰基-CoA硫解酶、截短的HMG-CoA还原酶、甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶、细胞色素P450还原酶、UGT74G1、UGT85C2、UGT91D2、EUGT11、UGTSL2、UGT76G1或其具有85％的氨基酸序列同一性、＞86％的氨基酸序列同一性、＞87％的氨基酸序列同一性、＞88％的氨基酸序列同一性、＞89％的氨基酸序列同一性、＞90％的氨基酸序列同一性、＞91％的氨基酸序列同一性、＞92％的氨基酸序列同一性、＞93％的氨基酸序列同一性、＞94％的氨基酸序列同一性、＞95％的氨基酸序列同一性、＞96％的氨基酸序列同一性、＞97％的氨基酸序列同一性、＞98％的氨基酸序列同一性、＞99％的氨基酸序列同一性的其突变型变体。

9.权利要求3的方法，其中以干重计，所述目标甜菊醇糖苷含量大于约95重量％。

10.一种消费品，其包含通过权利要求3的方法产生的高度纯化的目标糖苷组合物，其中所述产品选自食物、饮料、药物组合物、烟草产品、营养品组合物、口腔卫生组合物和化妆品组合物。