[发明专利]含有核黄素衍生物的培养基

说明书

本发明的课题在于，提供一种用于对iPS细胞、ES细胞等多能干细胞进行增殖培养的培养基，特别是，提供一种不会发生完全培养基的保存导致的劣化的细胞增殖用培养基，并且提供制造该培养基的方法。本发明提供一种含有核黄素衍生物的干细胞增殖用培养基等。

技术领域

本发明涉及保存稳定性、尤其是作为完全培养基以液体形式保存时的稳定性优异的干细胞、特别是多能干细胞增殖用的培养基及其制造方法等。

发明背景

使用iPS细胞、ES细胞等干细胞的再生医疗中，设想有效地使这些细胞增殖、其后分化成目标组织、进行移植。以细胞的增殖为目的，报告或市售有各种培养基(非专利文献1～3)。其大多是由放入了各种成分的多种瓶子构成，混合后使用。混合而得的物质通常被称为“完全培养基”。

多种瓶子包括例如由氨基酸、维生素、矿物质、缓冲剂等构成的基础培养基、由蛋白质等构成的补充剂，补充剂根据种类进一步分别容纳在2个至2个以上瓶子中。它们作为冷藏品或冷冻品供应。

一般，干细胞增殖用的培养基是在使用时将基础培养基和补充剂(一种或多种补充剂)混合制成完全培养基后以液体形式保存。完全培养基通常可以保存2周左右。然而，实际上，使用保存了2周的完全培养基时，存在细胞不生长的情况，而且，其原因还不清楚。

再生医疗中，能够稳定地培养、供应细胞的系统是不可或缺的，需要开发对应的培养基和该培养基的制造方法。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:Nakagawa M.,等,Sci Rep.2014；4:3594

非专利文献2:Ludwig T.E.,等,Nat.Biotechnol.,2006；24:185

非专利文献3:Chen,G.,等,Nat Methods,2011；8:424

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的目的在于，提供一种用于对细胞、特别是iPS细胞、ES细胞等多能干细胞进行增殖培养的培养基，特别是，目的在于提供一种在液体状态下稳定性高的细胞增殖用培养基和制造该培养基的方法等。

用于解决课题的方法

为了解决上述课题，本发明人等对培养基组成进行了各种变更，详细地对何种成分是培养基保存稳定性劣化的原因进行了研究。其结果是，确定了虽然核黄素(RFV)对于细胞的生长而言是必需的，但也是液体保存时培养基的劣化的原因。因此对RFV的替代成分进行了深入研究，结果发现，通过在培养基组成中不使用RFV、而是使用黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)、黄素单核苷酸(FMN)、核黄素四丁酸酯(RTB)等核黄素衍生物(RFV衍生物)，能够不使培养基劣化地保存，从而完成了本发明。

即，本发明如下。

[1]一种干细胞增殖用培养基，其含有核黄素衍生物。

[2]上述[1]所述的培养基，核黄素衍生物为选自由黄素腺嘌呤二核苷酸、黄素单核苷酸、核黄素四丁酸酯、它们的盐和它们的水合物组成的组的至少1种。

[3]上述[1]或[2]所述的培养基，核黄素衍生物为黄素腺嘌呤二核苷酸或其盐、或者其水合物(优选为黄素腺嘌呤二核苷酸二钠水合物)。

[4]上述[1]～[3]中任一项所述的培养基，干细胞为ES细胞或iPS细胞。

[5]上述[1]～[4]中任一项所述的培养基，其不含核黄素。

[6]一种干细胞增殖用培养基，其特征在于，其为将含有氨基酸、维生素、矿物质和缓冲剂的基础培养基以及一种或多种补充剂混合而成的培养基，核黄素衍生物包含在基础培养基中。