[发明专利]多重偶联和氧化方法

权利要求书

1.合成立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸的方法，包括以下步骤：

a)使与固相载体相连的核苷或寡核苷酸的受保护的5'-羟基末端脱保护，

b)将氧杂氮杂磷杂环戊烷亚磷酰胺单体与核苷或寡核苷酸的脱保护的5'-羟基末端偶联，形成亚磷酸三酯中间体，

c)用硫化试剂氧化亚磷酸三酯中间体，然后进行任选的洗涤步骤，

d)在同一个延伸循环内重复步骤b)和c)，

e)任选地重复步骤a)到d)以进行一个或多个进一步的延伸循环，和

f)将寡核苷酸脱保护和从固体载体上切割。

2.如权利要求1所述的方法，其中步骤d)至少进行两次。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述偶联反应在乙腈溶剂组合物中进行。

4.如权利要求2所述的方法，其中乙腈溶剂包含乙腈和芳族杂环溶剂。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述方法包括多个进一步的延伸循环。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸是反义寡核苷酸。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述芳族杂环溶剂在水中于20℃下具有pKa 4–7或为7–17。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述芳族杂环溶剂是芳族杂环碱。

9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述芳族杂环溶剂是芳族杂环酸。

10.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述芳族杂环溶剂选自吡啶、2-甲基吡啶、4-甲基吡啶、3-甲基吡啶、二甲基吡啶和吡咯。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中芳族杂环溶剂是吡啶。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中芳族杂环溶剂在乙腈中的浓度(v/v)是约0.1％至约50％(v/v)，例如约0.5％至约25％。

13.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中芳族杂环溶剂在乙腈中的浓度(v/v)是约0.5％至约10％，例如约1％至约5％之间，例如约2–4％，例如约2.5％，或约3.5％。