[发明专利]Fcγ受体突变体

说明书

本公开涉及包含Fcγ受体突变体的多肽。通过用不同的氨基酸序列置换Fcγ受体的部分氨基酸序列来优化本公开的Fcγ受体突变体，以便具有对免疫球蛋白优异的选择性结合能力，从而有效地用于延长药物的体内半衰期、检测和纯化免疫球蛋白、并抑制器官移植排斥或预防或治疗自身免疫性疾病的用途。

技术领域

本公开涉及与IgG抗体的结合能力提高的Fcγ受体突变体。

背景技术

在人免疫细胞中表达的Fcγ受体(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa)与IgG抗体的Fc区域(下部铰链区域和上部CH2区域)结合。在这些Fcγ受体中，在血液中FcγRI对IgG的亲和力最高。但是，由于非常差的热稳定性和低表达水平，在医学或工业应用中存在困难。

同时，FcγRIIa是在各种免疫细胞，例如巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞等的表面表达的跨膜蛋白。它是针对IgG的亲和力相对较低(K_D＝约10^-6)的受体。FcγRIIa与IgG抗体的Fc区域(下部铰链区域和上部CH2区域)结合，并通过细胞内信号传导机制激活免疫细胞。

如果可以制备和应用存在于细胞外区域并且针对IgG的亲和力比野生型Fcγ受体高得多的可溶性Fc-γ受体，则可以有效抑制将自体细胞识别为抗原的自身抗体与免疫细胞表面的Fcγ受体的结合。这可以明确地用于治疗自身免疫性疾病，该疾病是其中自身抗体在器官中积聚且自体细胞被识别为外源抗原，从而导致炎症的病症。

通常，除抗体外，大多数蛋白药物的体内保留时间短，血清半衰期不超过24小时。抗体IgG通过胞饮作用随机进入细胞，然后释放到中性pH的血流中，而不会通过与FcRn结合而在弱酸性pH的内体中降解。因此，其在体内保留约3周。Fcγ受体与抗体IgG结合的过程可用于开发延长蛋白药物的血清半衰期的融合伴侣。

对针对靶疾病表现出高特异性且几乎无副作用的蛋白药物的需求正在稳步增长，与之一致的，在世界范围内正在积极开展改善蛋白药物的功效和稳定性的研究。特别是，由于蛋白药物的血清半衰期在蛋白的作用机理、副作用程度、治疗功效、生产成本、施用次数等方面起着至关重要的作用，因此世界领先的制药公司和蛋白工程研究组积正在积极开展延长蛋白药物半衰期的研究。

作为代表性实例，将靶蛋白用PEG(聚乙二醇)聚合物修饰，或将靶蛋白与抗体Fc或白蛋白融合以延长血清半衰期。

如果将生物相容性聚合物例如PEG缀合于靶蛋白的特异性位点或非特异性结合到几个位点，则可以减少由于蛋白酶的降解。另外，由于分子量增加，肾脏的排泄可能减少，血液保留时间可能延长。由于Enzon在1990年开发的PEG修饰的腺嘌呤脱氨酶获得了USFDA的批准并投放市场，因此可商购获得10多种产品并将其用于临床。罗氏公司用PEG聚合物修饰干扰素-α(PEG化)以用作丙型肝炎的治疗剂，并将其以品牌名称Pegasys商业化。安进公司用20kDa PEG修饰了被开发用于治疗白细胞减少的非格司亭(Neupogen)的N端，以用于商业化的持续治疗形式Neulasta。但是，当大量注射蛋白时，PEG部分会从体内缓慢清除。另外，据报道长期注射高分子量PEG可能引起副作用。血清稳定性与PEG的分子量密切相关。分子量为40000Da或高于40000Da的PEG不易制备，并且众所周知的是，随着分子量的增加，由于与蛋白的反应性低，产率降低，并且蛋白本身的滴度也迅速降低。另外，因为PEG聚合物是具有各种分子量分布的聚合物的混合物，所以与PEG缀合的蛋白治疗剂是异质的，并且在生产和质量控制上造成困难。因此，迫切需要开发新的蛋白工程技术以延长蛋白药物的血清半衰期，该技术以用例如PEG的聚合物进行形式修饰为特征。