[发明专利]高通量转座子诱变

权利要求书

1.一种使微生物进化以获得所期望表型的高通量HTP基因组工程改造方法，包含：

a.利用转座子诱变扰动具有相同微生物菌株背景的初始多种微生物的基因组，借此创建包含具有独特基因变异的个别微生物菌株的初始HTP基因设计转座子诱变微生物菌株文库；

b.针对所期望表型来筛选和选择所述初始HTP基因设计转座子诱变微生物菌株文库中的个别菌株；

c.提供各自包含独特基因变异组合的后续多种微生物，所述基因变异选自前一步骤所筛选的至少两种个别菌株中所存在的基因变异，借此创建后续HTP基因设计转座子诱变微生物菌株文库；

d.针对所期望表型来筛选和选择所述后续HTP基因设计转座子诱变微生物菌株文库中的个别微生物菌株；和

e.以线性或非线性方式重复步骤c)-d)一或多次，直到微生物已获得所期望表型为止，其中每次后续迭代创建新的HTP基因设计转座子诱变微生物菌株文库，所述微生物菌株文库包含具有独特基因变异的个别菌株，所述独特基因变异为选自前一个HTP基因设计转座子诱变微生物菌株文库的至少两种个别菌株的基因变异的组合。

2.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述转座子诱变包含：提供转座酶和DNA有效负载序列。

3.根据权利要求2所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述转座酶和DNA有效负载序列形成转座酶-DNA有效负载复合物。

4.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述转座子诱变使得转座子随机插入所述多种微生物的基因组中。

5.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述转座子诱变产生功能丧失LoF表型。

6.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述转座子诱变产生功能获得GoF表型。

7.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述转座子诱变使含有功能获得GoF型元件的DNA有效负载序列插入所述基因组中。

8.根据权利要求7所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述功能获得型元件选自由以下组成的群组：启动子、溶解性标签元件，和反向可选标记。

9.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述转座子诱变使含有功能丧失LoF型元件的DNA有效负载复合物插入。

10.根据权利要求9所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述功能丧失型元件是标记。

11.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述转座子诱变包含用至少两种转座酶-DNA有效负载复合物转化所述多种微生物，所述至少两种复合物中的一种含有功能获得GoF型元件且一种含有功能丧失LoF型元件。

12.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述转座子诱变利用EZ-Tn5转座子诱变系统。

13.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述基因组是通过利用转座子诱变和以下中的至少一种来扰动：SNP交换、启动子交换、终止子交换、序列优化或其任何组合。

14.根据权利要求1所述的HTP基因组工程改造方法，其中所述微生物是原核生物。