[发明专利]包含连续上皮的视网膜组织的成熟方法

权利要求书

1.维持视网膜组织的连续上皮结构的方法，其包括在含有抑制神经视网膜祖细胞的细胞分化的浓度的甲基供体或甲基供体的基质，及抑制轴突伸长的浓度的轴突伸长抑制剂的培养基中培养视网膜组织。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，甲基供体或甲基供体的基质为甲硫氨酸。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，培养基中的甲硫氨酸的浓度为25mg/L以上。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，轴突伸长抑制剂为糖皮质激素。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，糖皮质激素为皮质酮。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，培养基中的皮质酮的浓度为1nM以上。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，培养基中的L-谷氨酸的浓度低于50μM。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，培养基中的L-天冬氨酸的浓度低于50μM。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，选自由谷胱甘肽、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、α-生育酚、及L-半胱氨酸组成的组中的至少一种抗氧化剂在培养基中的浓度为以下浓度范围内：

谷胱甘肽：100ng/mL以下，

过氧化氢酶：100U/mL以下，

超氧化物歧化酶：100U/mL以下，

α-生育酚：50nM以下，

半胱氨酸：0.26mM以下。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，培养基中的黄体酮浓度为100nM以下。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，选自由次黄嘌呤、胸苷及维生素B12组成的组中的至少一种核酸合成促进剂在培养基中的浓度为以下浓度范围内：

次黄嘌呤：低于15μM，

胸苷：低于1.5μM，

维生素B12：低于0.68mg/L(0.5μM)。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，培养基包含的配合了B27补充剂的Neurobasal培养基以容量比计为50％以上。

13.根据权利要求1～12中任一项所述的方法，其中，所述视网膜组织为具有连续上皮结构的视网膜组织。

14.根据权利要求1～13中任一项所述的方法，其中，所述视网膜组织在培养开始时刻处于发育早期或其后的阶段。

15.根据权利要求14所述的方法，其包括在视杆细胞前体细胞出现之前的期间培养视网膜组织。

16.视网膜组织的连续上皮结构的维持方法，其包括以下步骤：

(1)将包含视网膜祖细胞，且处于未出现神经节细胞的分化阶段的视网膜组织在细胞增殖用基础培养基中进行培养的步骤，最长培养到视细胞前体细胞出现的期间；

(2)将(1)中得到的视网膜组织在以容量比1∶1～1∶3将细胞增殖用基础培养基与连续上皮组织维持用培养基混合的培养基中进行培养的步骤，最长培养到视锥细胞前体细胞的出现率达到最大时；及

(3)将(2)中得到的视网膜组织在连续上皮组织维持用培养基中进行培养的步骤，至少培养到视杆细胞前体细胞出现的期间。

17.连续上皮组织维持用培养基，其含有抑制神经视网膜祖细胞的细胞分化的浓度的甲基供体或甲基供体的基质、及抑制轴突伸长的浓度的轴突伸长抑制剂。