[发明专利]用于O-糖蛋白的蛋白酶和结合多肽

权利要求书

1.一种具有O-糖基化蛋白特异性内切蛋白酶活性的多肽，所述多肽包含：

(a)SEQ ID NO:1的氨基酸序列；

(b)与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少85％一致的氨基酸序列；或

(c)这样的氨基酸序列：所述氨基酸序列为SEQ ID NO:1的序列的片段或与SEQ ID NO:1的氨基酸序列85％一致的氨基酸序列的片段。

2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少85％一致的氨基酸序列包含基序HEbbH，其中b是不带电荷的氨基酸，任选地，为A、C、F、G、I、L、M、N、P、Q、S、T、V或W，并且任选地，其中所述基序存在于所述多肽中在与SEQ ID NO:1的第181至185位对应的位置处。

3.根据权利要求2所述的多肽，其特征在于，所述基序包含序列HEIGH或HELGH，优选HELGH。

4.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其特征在于，所述多肽包含基序abxHEbbHbc，其中：

(a)a为氨基酸V、T或G；

(b)b是不带电荷的氨基酸，任选地为A、C、F、G、I、L、M、N、P、Q、S、T、V或W；

(c)x是任何氨基酸；和

(d)c为疏水性氨基酸，任选地为A、C、F、I、L、M、P、V、W或Y。

任选地，其中所述基序包含序列GMAHELGHGL或GVAHELGHNF，优选GMAHELGHGL。

5.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其特征在于，所述多肽在N末端包含另外的甲硫氨酸和/或在C末端包含His标签，所述标签可以通过接头与C末端连接，任选地，其中所述多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽，其特征在于，所述多肽以溶液、冻干或固定的形式提供，任选地其中所述多肽与唾液酸酶，优选Am1757或Am1757和Am0707的混合物一起提供，其中所述Am1757是由SEQ ID NO:11组成的多肽和/或其中Am0707是由SEQ ID NO:14组成的多肽。

7.一种水解O-糖蛋白的方法，其中，所述方法包括使包含蛋白质的样品与根据权利要求1至6中任一项所述的多肽接触，并且任选地还包括对水解产物的检测或分析。

8.一种用于评估蛋白质的糖基化状态的方法，所述方法包括使包含所述蛋白质的样品与根据权利要求1至6中任一项所述的多肽接触，以及检测和/或分析所产生的产物，任选地，其中存在或不存在切割产物用于确定所述样品中存在或不存在O-糖蛋白，和/或其中进行所述分析以鉴定O-糖链的类型和/或O-糖链与O-糖蛋白的连接位置。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述分析或检测通过亲和色谱、SDS-PAGE、HPLC或质谱来实施。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其特征在于，在使所述蛋白质或所述样品与权利要求1至6所述的多肽接触之前或同时，将所述样品与唾液酸酶一起孵育，优选地，其中所述唾液酸酶是Am1757或Am1757和Am0707的混合物。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述Am1757是由SEQ ID NO:11组成的多肽，和/或其中所述Am0707是由SEQ ID NO:14组成的多肽。