[发明专利]低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法、测定用试剂和测定用试剂盒

说明书

基于对环境的考虑，本发明提供用于在不使用具有烷基酚结构的表面活性剂的情况下简便且准确地测定样本中的低密度脂蛋白中的胆固醇(LDL‑C)的方法。一种样本中的LDL‑C的测定方法，其特征在于，使样本与(i)胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的组合、或者(ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的组合在水性介质中反应，测定该反应中所生成的物质或被消耗的物质，所述水性介质含有[a]选自由聚氧乙烯烷基醚和聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚组成的组中的一种以上的表面活性剂、以及[b]聚氧乙烯聚氧丙烯缩合物，不含有具有烷基酚结构的表面活性剂。

技术领域

本发明涉及样本中包含的低密度脂蛋白(以下称为LDL)中的胆固醇(以下简记为LDL-C)的测定方法、测定用试剂和测定用试剂盒。

本申请基于2017年9月1日在日本提交的日本特愿2017-168235号要求优先权，将其内容援引于此。

背景技术

LDL具有对外周细胞供给胆固醇的作用，是以冠状动脉硬化症为代表的各种动脉硬化症的直接因素。LDL-C的增加是动脉硬化性疾病的主要危险因素之一，分别定量在临床上是有用的。

以往的LDL-C的定量方法可以列举超速离心法、电泳法、利用弗里德瓦尔德(Friedewald)公式的运算方法等。超速离心法是利用脂蛋白的比重的差异，使用超速离心分离机分离LDL后测定其胆固醇量的方法(非专利文献1)。但是，利用超速离心法进行的分离操作繁琐，在快速性、简便性等方面存在不足。电泳法有：利用脂蛋白的电荷的差异，以琼脂糖凝胶等作为支撑体而进行分离的方法；利用脂蛋白的粒子尺寸的差异，以聚丙烯酰胺凝胶作为支撑体而进行分离的方法；等。但是，电泳法缺乏定量性，在简便性、经济性等方面存在问题。在利用弗里德瓦尔德公式的运算方法中，由总胆固醇(以下简记为T-C)、高密度脂蛋白(以下简记为HDL)中的胆固醇(以下简记为HDL-C)和总甘油三酯(以下简记为T-TG)的测定值按照下述计算式算出LDL-C量(非专利文献2)，但该方法受到血清中的T-TG的含量和饮食的影响，因此准确性存在问题。

(LDL-C)＝(T-C)-(HDL-C)-(T-TG)/5

另外，近年来，还报道了无需超速离心法等分离操作、可搭载于通用的自动分析机装置中的LDL-C的定量方法。

这些之中，作为对LDL-C进行定量的方法，已知下述方法。

一种被测试样中的LDL-C的定量方法，其由第一步骤和第二步骤构成，第一步骤中，在作用于LDL以外的脂蛋白的表面活性剂的存在下，使胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶起作用，消除所生成的过氧化氢，由此消除被测试样中的HDL、超低密度脂蛋白(以下称为VLDL)和乳糜微粒各脂蛋白中的胆固醇；第二步骤中，接着对被测试样中的残存胆固醇进行定量(专利文献1)。

一种LDL-C的定量方法，其中，对血清添加选自聚氧乙烯亚烷基苯基醚和聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚中的表面活性剂、以及胆固醇测定用酶试剂，使脂蛋白中的胆固醇中的HDL中和VLDL中的胆固醇优先发生反应后，测定剩余的胆固醇的反应量(专利文献2)。

一种方法，其中，对生物试样添加聚氧乙烯衍生物和聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、以及胆固醇测定用酶，选择性地测定脂蛋白中的胆固醇中的LDL-C(专利文献3)。

一种LDL-C的测定法，其特征在于，在二甲基-α-环糊精或/和聚-β-环糊精的存在下对生物试样进行测定(专利文献4)。

一种直接且选择性地测定包含乳糜微粒、HDL、LDL、VLDL中的任意一种以上的试样中的胆固醇的方法，其中，在含有磷脂、磷脂类似基团的化合物的存在下对试样中的LDL-C进行定量(专利文献5)。