[发明专利]抗CRISPR多肽用于Cas核酸酶特异性激活的用途

说明书

本发明涉及包含(i)编码抗CRISPR(Acr)多肽的序列和(ii)miRNA靶序列的多核苷酸、并且涉及包含其的载体和宿主细胞。本发明还涉及一种试剂盒，其包含(I)包含(i)编码抗CRISPR(Acr)多肽的序列和(ii)RNA干扰(RNAi)靶序列的第一多核苷酸；和Cas核酸酶或包含编码Cas核酸酶的可表达基因的第二多核苷酸；(II)包含(i)编码抗CRISPR(Acr)多肽的序列和(ii)RNA干扰(RNAi)靶序列的第一多核苷酸，和包含编码Cas核酸酶的第二片段的可表达基因的第二多核苷酸，所述第一多核苷酸还包含编码Cas核酸酶的第一片段的可表达基因，其中所述Cas核酸酶的第一片段和第二片段一起重构活性Cas核酸酶；或(III)包含(i)编码抗CRISPR(Acr)多肽的序列、(ii)RNA干扰(RNAi)靶序列、和(iii)编码Cas核酸酶的序列的第一多核苷酸；和包含编码抑制性RNA的可表达基因的第二多核苷酸，所述抑制性RNA优选为与所述RNAi靶序列杂交的siRNA或miRNA，更优选为与所述RNAi靶序列杂交的siRNA。此外，本发明涉及与上述元件有关的方法和用途。

本发明涉及包含(i)编码抗CRISPR(Acr)多肽的序列和(ii)miRNA靶序列的多核苷酸，并且涉及包含其的载体和宿主细胞。本发明还涉及一种试剂盒，其包含(I)包含(i)编码抗CRISPR(Acr)多肽的序列和(ii)RNA干扰(RNAi)靶序列的第一多核苷酸；和Cas核酸酶或包含编码Cas核酸酶的可表达基因的第二多核苷酸；(II)包含(i)编码抗CRISPR(Acr)多肽的序列和(ii)RNA干扰(RNAi)靶序列的第一多核苷酸，和包含编码Cas核酸酶的第二片段的可表达基因的第二多核苷酸，所述第一多核苷酸还包含编码Cas核酸酶的第一片段的可表达基因，其中所述Cas核酸酶的第一片段和第二片段一起重构活性Cas核酸酶；或(III)包含(i)编码抗CRISPR(Acr)多肽的序列、(ii)RNA干扰(RNAi)靶序列、和(iii)编码Cas核酸酶的序列的第一多核苷酸；和包含编码抑制性RNA的可表达基因的第二多核苷酸，所述抑制性RNA优选为与所述RNAi靶序列杂交的siRNA或miRNA，更优选为与所述RNAi靶序列杂交的siRNA。此外，本发明涉及与上述元件有关的方法和用途。

细菌和古细菌中的CRISPR(成簇的规则间隔的短回文重复序列)系统介导外来入侵核酸的特异性降解(Barrangou等人，2007；Bhaya等人，2011；Terns和Terns，2011；Wiedenheft等人，2012)。该系统包含CRISPR相关(Cas)核酸酶，其可被短的向导RNA(gRNA)编辑，从而在特定的序列互补的DNA基因座上诱导双链断裂(Jinek等人，2012)。多样的CRISPR-Cas系统已被用于哺乳动物细胞和动物的基因组工程设计，最主要的是来自化脓链球菌的CRISPR-Cas9系统(SpyCas9)(Cong等人，2013；Jinek等人，2013；Mali等人，2013)。CRISPR-Cas9系统也已成功应用于胚胎干细胞(Wang等人，2013)以及动物中的基因组编辑。例如，据报道转基因小鼠稳定表达SpyCas9，因此可以进行体内基因敲除筛选(Platt等人，2014)。替代地，还实现了通过例如流体动力学质粒DNA注射(Yin等人，2014)或腺相关病毒(AAV)载体(Senis等人，2014；Ran等人，2015)的Cas蛋白和gRNA组分的瞬时且有效的体内递送。不足为奇的是，基于CRISPR-Cas的人类基因治疗的潜力被认为是巨大的，并激发了越来越多治疗遗传性疾病的临床前研究(Schmidt和Grimm，2015年；Dai等人，2016年；Xue等人，2016)。