[发明专利]重配流感病毒的阶段性制备方法

说明书

在抗原株与供体株具有类似的抗原性的情况下，提供一种具有两种以上的流感病毒的基因组片段的重配流感病毒的制备方法。使用包含抗原蛋白质(x)的第一流感病毒(1)、具有与株(1)类似的抗原性的抗原蛋白质(x’)的第二流感病毒(2)、具有与株(1)不同的抗原性的抗原蛋白质(y)的第三流感病毒(3)、且包含以下工序：使宿主感染株(2)和株(3)并进行共培养来制备重配流感病毒并从该病毒中选择具有抗原蛋白质(y)的流感病毒(Y)，接着使宿主感染株(1)和上述选择出的株(Y)并进行共培养，并从由株(1)和株(Y)制备的重配流感病毒中选择具有抗原蛋白质(x)的流感病毒(X)。

技术领域

本发明涉及具有两种以上的流感病毒基因组片段的重配流感病毒的制备方法，涉及包括至少两个阶段的重配工序的重配流感病毒制备方法。

本申请要求通过引用而援引于此的日本申请特愿2017-163114号的优先权。

背景技术

流感是每年在世界范围内流行的传染病，其由流感病毒引起。流感病毒属于正粘病毒科，具备具有脂质双层膜结构的包膜。分类为甲型、乙型以及丙型这三个属，分别称为甲型流感病毒、乙型流感病毒和丙型流感病毒。一般情况下，流感病毒特别是指甲型或乙型。甲型、乙型以及丙型的不同基于构成病毒粒子的蛋白质中的M1蛋白质与NP蛋白质的抗原性的不同。另外，即使是相同的甲型、乙型，根据作为包膜表面上的分子的红血球凝聚素(血凝素，以下称为“HA”)、神经氨酸酶(以下称为“NA”)的抗原性的不同，也分类为多个亚型和株。

流感病毒以较高的概率会发生抗原变化，从而产生新型的流感病毒。甲型流感病毒基于其HA以及NA的抗原性而被分类为16种HA(H1～H16)亚型以及9种NA(N1-N9)亚型。甲型流感病毒的三种HA(H1、H2以及H3)亚型是特别重要的病原体。甲型流感病毒的H1N1亚型以及H3N2亚型季节性地传播并引起人类感染。2003年，高致死性的禽源流感病毒H5亚型作为人类病原体出现。2009年4月，H1N1亚型病毒作为一种新型流感病毒出现，并在人群中急速地蔓延。由于流感还有可能会发生大流行，因此要求在数量上确保流感疫苗。

流感疫苗采用利用发育鸡胚而使流感病毒增殖的方法。另外，在培养细胞中使流感病毒增殖的方法也正在实用化。基于由传染病发生动向调查工作获得的国内的流行状况、针对国内分离病毒的抗原性、基因分析的成绩等的信息等，进行下一年度季节流行预测，来选择流感疫苗株。但是，根据株的不同，有时培养上清液的感染效价较低，增殖性的改善是重要的课题。当在流感病毒的增殖中利用发育鸡胚、培养细胞的情况下，根据流感病毒的亚型、株的不同而宿主中的病毒的增殖性降低成为问题。因此，进行了通过基因重组技术来制备提高了宿主中的增殖性的流感病毒的基因重组体的尝试。作为基因重组技术，可举例示出为重配法、反向遗传学法(以下称为“RG法”)。作为RG法之一，可列举为将用于供给病毒RNA(vRNA)的8种质粒(Pol I质粒)和对用于形成病毒粒子所需的结构蛋白质进行编码的4种表达质粒(Pol II质粒)的合计12种质粒同时导入细胞来制备流感病毒的基因重组体的方法(非专利文献1)。

在细胞培养流感疫苗中，优选使用在培养细胞中显示出高增殖性的种子病毒，并且为了稳定地供给疫苗而要求高效地制备该种子病毒。在专利文献1中公开了如下内容：使用具有来源于与抗原株相同的甲型流感病毒亚型的主链序列的核苷酸、在HA序列中导入了弱毒化突变的核苷酸并通过RG法制备的重组病毒在细胞中显示出了高增殖性。但是，在RG法中，由于将多个质粒同时导入细胞，因此对于宿主细胞而言负担较大。另外，由于各种质粒的制备需要时间，因此存在难以迅速地制备基因重组体的问题。

作为流感病毒的基因重组技术，正在进行如下重配法的研究：使宿主共感染至少两种以上的流感病毒，在增殖的过程中交换基因组片段并进行重组来制备基因重组体。通过重配法来尝试制备包含对具有所期望的抗原性的蛋白质进行编码的基因组片段和对所期望的主链的蛋白质进行编码的基因组片段的重配流感病毒。