[发明专利]神经纤毛蛋白-1（NRP1）作为细胞表面标志物用于分离人心脏心室祖细胞的用途

权利要求书

1.一种用于分离人心脏心室祖细胞的方法，所述方法包括：

使含有心脏祖细胞的人细胞培养物与一种或多种同神经纤毛蛋白-1(NRP1)反应的试剂接触；和

将NRP1反应性阳性细胞与非反应性细胞分开，从而分离出人心脏心室祖细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，使所述人细胞培养物进一步与同人心脏心室祖细胞反应的至少一种第二试剂接触；并且使NRP1反应性/第二试剂反应性阳性细胞与非反应性细胞分开，从而分离出人心脏心室祖细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述至少一种第二试剂与JAG1、FZD4、LIFR、FGFR3和/或TNFSF9反应。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，使所述人细胞培养物在与所述至少一种第二试剂接触之前与所述同NRP1反应的试剂接触。

5.根据权利要求2所述的方法，其中，使所述人细胞培养物在与所述同NRP1反应的试剂接触之前与所述至少一种第二试剂接触。

6.根据权利要求2所述的方法，其中，使所述人细胞培养物与所述同NRP1反应的试剂并与所述至少一种第二试剂同时接触。

7.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使所述人心脏心室祖细胞与一种或多种同在人万能干细胞表面上表达的至少一种标志物反应的试剂接触，以及将标志物非反应性阴性细胞与反应性细胞分开，从而进一步分离出人心脏心室祖细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述在人万能干细胞表面上表达的至少一种标志物选自由TRA-1-60、TRA-1-81、TRA-2-54、SSEA1、SSEA3、SSEA4、CD9、CD24、E-钙粘蛋白和足萼蛋白及其组合组成的组。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述在人万能干细胞表面上表达的至少一种标志物是TRA-1-60。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述同TRA-1-60反应的试剂是抗TRA-1-60抗体。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述同NRP1反应的试剂是抗NRP1抗体。

12.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述同NRP1反应的试剂是可溶性NRP1配体融合蛋白。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述NRP1配体是VEGF-A或Sema3A。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，通过荧光激活细胞分选(FACS)或磁性激活细胞分选(MACS)将所述NRP1反应性阳性细胞与所述非反应性细胞分开。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，所述人心脏心室祖细胞被进一步培养和分化，使得它们是MLC2v阳性的。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中，所述含有心脏祖细胞的人细胞培养物源自人诱导性万能干细胞的人胚胎干细胞。

17.一种用于分离人心脏心室祖细胞的方法，所述方法包括：

在产生心脏祖细胞的条件下培养人万能干细胞以获得细胞培养物；

使所述细胞培养物与一种或多种同神经纤毛蛋白-1(NRP1)反应的试剂接触；和

将NRP1反应性阳性细胞与非反应性细胞分开，从而分离出人心脏心室祖细胞。