[发明专利]定量的液体活检诊断系统与方法

权利要求书

1.一种表征和定量血液样品中靶细胞的方法，该方法包括以下步骤：

(a)从受试者获得血液样品，

(b)通过以下步骤(i)到(vi)中的一个或多个步骤来制备样品，包括

(i)离心以从血清层分离细胞层

(ii)去除细胞层中的一层，

(iii)在缓冲液中悬浮从步骤(b)(ii)中去除的层，

(iv)纯化(b)(iii)的悬浮层，

(v)固定(b)(iv)的纯化层，以及

(vi)将(b)(v)的固定层免疫染色和/或荧光原位杂交(FISH)染色，

(c)将制备好的样品从(b)置于选择性平面图像显微镜下，通过激光片光源在多个横截面扫描样品，以获得连续的横截面图像，

(d)收集足够数量的连续的横截面图像，

(e)编译连续的横截面图像以生成合成图像，以及

(f)评估合成图像以表征和定量任何靶细胞的血液样品。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(c)的扫描是在激光片光的一个或多个所选择的激发频率下进行的。

3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(d)的收集涉及与步骤(c)的激光片光源正交的样品的荧光发射的检测。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(f)的合成图像是三维图像。

5.根据权利要求1所述的方法，其中(b)(i)或(b)(ii)的层是血沉棕黄层。

6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)(iii)的缓冲液是磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)(V)的固定是在维持细胞结构的凝胶中，例如琼脂糖凝胶，或胶原凝胶，或聚丙烯酰胺凝胶。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物或鸟类。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者是人。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞被表征。

11.根据权利要求11所述的方法，其中所述靶细胞被定量。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞为循环肿瘤细胞(CTC)。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞是白细胞(WBC)亚群。

14.根据权利要求11所述的方法，其中所述白细胞(WBC)亚群是T-细胞。

15.一种用于定量和表征生物样品中靶细胞的系统，该系统包括：

(a)选择性平面照明显微镜

(b)样品固定装置，该样品固定装置用于容纳生物样品，

(c)检测器，该检测器用于收集从显微镜垂直(90度)反射到光学平面的光图像，

(d)计算机界面，以及

(e)计算机，该计算机用于编译光图像以生成三维图像。

16.根据权利要求15所述的系统，进一步地包括用于分析3-D图像以检测靶细胞的软件。

17.根据权利要求15或16所述的系统，其中所述选择性平面照明显微镜包括：

(i)激光光源，

(ii)装置，该装置用于从激光光源产生光片，以及

(iii)物镜。

18.根据权利要求17所述的系统，其中用于产生光片的装置是圆柱形透镜。