[发明专利]包封的多核苷酸和使用方法

权利要求书

1.一种包含重组DNA分子的脂质纳米颗粒(LNP)，所述重组DNA分子包含编码具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸序列可操作地连接至能够结合哺乳动物RNA聚合酶II(Pol II)的启动子序列并且由3'核酶编码序列和5'核酶编码序列侧接，

其中所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸是非病毒来源的。

2.如权利要求1所述的LNP，其中所述具有复制能力的病毒基因组是单链RNA(ssRNA)病毒。

3.如权利要求1所述的LNP，其中所述具有复制能力的病毒基因组是单链RNA(ssRNA)病毒，是正义((+)-义)或负义((-)-义)ssRNA病毒。

4.如权利要求3所述的LNP，其中所述具有复制能力的病毒基因组是(+)-义ssRNA病毒，并且所述(+)-义ssRNA病毒是小核糖核酸病毒。

5.如权利要求4所述的LNP，其中所述小核糖核酸病毒是塞内卡谷病毒(SVV)或柯萨奇病毒。

6.如权利要求1-5中任一项所述的LNP，其中使所述LNP与细胞接触使得所述细胞产生病毒颗粒，并且其中所述病毒颗粒是感染性且溶解性的。

7.如权利要求1-6中任一项所述的LNP，其中所述重组DNA分子还包含编码外源性有效负载蛋白的多核苷酸序列。

8.如权利要求7所述的LNP，其中所述外源性有效负载蛋白是荧光蛋白、酶蛋白、细胞因子、趋化因子或能够结合至细胞表面受体的抗原结合分子。

9.如权利要求8所述的LNP，其中所述细胞因子选自Flt3配体和IL-18。

10.如权利要求8所述的LNP，其中所述趋化因子选自CXCL10和CCL4。

11.如权利要求8所述的LNP，其中所述抗原结合分子能够结合至并且抑制免疫检查点受体。

12.如权利要求11所述的LNP，其中所述免疫检查点受体是PD1。

13.如权利要求1-12中任一项所述的LNP，其中微小RNA(miRNA)靶序列(miR-TS)盒被插入所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的核酸序列中，其中所述miR-TS盒包含一个或多个miRNA靶序列，并且其中一种或多种所述相应miRNA在细胞中的表达抑制所述具有复制能力的病毒基因组在所述细胞中的复制。

14.如权利要求13所述的LNP，其中所述一种或多种miRNA选自miR-124、miR-1、miR-143、miR-128、miR-219、miR-219a、miR-122、miR-204、miR-217、miR-137和miR-126。

15.如权利要求14所述的LNP，其中所述miR-TS盒包含miR-124靶序列的一个或多个拷贝、miR-1靶序列的一个或多个拷贝以及miR-143靶序列的一个或多个拷贝。

16.如权利要求14所述的LNP，其中所述miR-TS盒包含miR-128靶序列的一个或多个拷贝、miR-219a靶序列的一个或多个拷贝以及miR-122靶序列的一个或多个拷贝。

17.如权利要求14所述的LNP，其中所述miR-TS盒包含miR-128靶序列的一个或多个拷贝、miR-204靶序列的一个或多个拷贝以及miR-219靶序列的一个或多个拷贝。