[发明专利]短核酸的多重检测

权利要求书

1.反应混合物，其包含：

a) 第一双尾引物，其从5'至3'包含：

i)与第一靶标核酸的5'末端互补的序列；

ii)第一臂序列；

iii)第一茎序列；

iv)环序列；

v)与所述第一茎序列互补的第二茎序列；

vi)第二臂序列；和

vii)与所述第一靶标核酸的3'末端互补的序列；

b) 第二双尾引物，其从5'至3'包含：

i)与第二靶标核酸的5'末端互补的序列；

ii)所述第一臂序列；

iii)所述第一茎序列；

iv)所述环序列；

v)与所述第一茎序列互补的第二茎序列；

vi)所述第二臂序列；和

vii)与所述第二靶标核酸的3'末端互补的序列；

c) 与所述第一靶标核酸的逆转录产物互补的第一靶标特异性反向PCR引物；

d)与所述第二靶标核酸的逆转录产物互补的第二靶标特异性反向PCR引物；

e) 与所述第一臂序列、第一茎序列和/或环序列互补的通用正向PCR引物；

f) 第一可检测标记的探针，其从5'至3'包含：

i)与所述第二茎序列和/或所述第二臂序列互补的序列；和

ii)与以下互补的序列：与所述第一靶标核酸的3'末端互补的序列；和

iii)与所述第一靶标核酸的逆转录产物互补的序列；和

g) 第二可检测标记的探针，其从5'至3'包含：

i)与所述第二茎序列和/或所述第二臂序列互补的序列；和

ii)与以下互补的序列：与所述第二靶标核酸的3'末端互补的序列；和

iii)与所述第二靶标核酸的逆转录产物互补的序列。

2.权利要求1的反应混合物，其进一步包含：

h) 第三双尾引物，其从5'至3'包含：

i)与第三靶标核酸的5'末端互补的序列；

ii)所述第一臂序列；

iii)所述第一茎序列；

iv)所述环序列；

v)与所述第一茎序列互补的第二茎序列；

vi)所述第二臂序列；和

vii)与所述第三靶标核酸的3'末端互补的序列；

i) 与所述第三靶标核酸的逆转录产物互补的第三靶标特异性反向PCR引物；和

j) 第三可检测标记的探针，其从5'至3'包含：

i)与所述第二茎序列和/或所述第二臂序列互补的序列；和

ii)与以下互补的序列：与所述第三靶标核酸的3'末端互补的序列；和

iii)与所述第三靶标核酸的逆转录产物互补的序列。

3.权利要求2的反应混合物，其进一步包含：

k) 第四双尾引物，其从5'至3'包含：

i)与第四靶标核酸的5'末端互补的序列；

ii)所述第一臂序列；

iii)所述第一茎序列；

iv)所述环序列；

v)与所述第一茎序列互补的第二茎序列；

vi)所述第二臂序列；和

vii)与所述第四靶标核酸的3'末端互补的序列；

l) 与所述第四靶标核酸的逆转录产物互补的第四靶标特异性反向PCR引物；和

m) 第四可检测标记的探针，其从5'至3'包含：

i)与所述第二茎序列和/或所述第二臂序列互补的序列；和

ii)与以下互补的序列：与所述第四靶标核酸的3'末端互补的序列；和

iii)与所述第四靶标核酸的逆转录产物互补的序列。

4.前述权利要求中任一项的反应混合物，其中与所述靶标核酸中的每一个的5'末端互补的序列长度独立地为4-10个核苷酸。

5.前述权利要求中任一项的反应混合物，其中与所述靶标核酸中的每一个的5'末端互补的序列长度独立地为5-8个核苷酸。

6.前述权利要求中任一项的反应混合物，其中与所述靶标核酸中的每一个的3'末端互补的序列长度独立地为4-10个核苷酸。