[发明专利]有机着色细颗粒、诊断药试剂盒及体外诊断方法

说明书

提供具有良好的本底和检查结果的再现性、具有充分的检出灵敏度的免疫色谱诊断试剂盒中使用的有机着色细颗粒。本发明的有机着色细颗粒的特征在于，平均粒径为100～650nm，显色强度为1.0～10.0，长径(L)/短径(D)所示的球形度为1.0～2.5，并且，在粒径400nm～12000nm的范围内检测总个数100000个颗粒时，粒径700nm以上的粗大颗粒的存在率为5％以下。

技术领域

本发明涉及源自有机高分子的有机着色细颗粒、以及使用其的诊断药试剂盒及体外诊断方法。

背景技术

近年开发了短时间内进行病毒、细菌等病原体感染的有无、妊娠的有无、癌标记物的有无、食品中的特定原材料、残留农药等有害物质的有无等各种检查的简易检查试剂、诊断药、诊断试剂盒。它们利用基于各检查对象物质和与检查对象物质特异性反应的物质的特异反应。特别是使用基于抗原和抗体的抗原抗体反应的免疫学测定法，开发了免疫色谱测定法、比浊免疫测定法、酶免疫测定法、化学发光测定法、放射免疫测定法、利用表面等离子体共振的测定法等很多测定方法。而且，这些测定法被用于医院、诊疗所等中的疾病等的检查、食品公司等中的食物检查等。其中，免疫色谱测定法由于无需特別的设备、仪器、知识，操作也简便，廉价，能够迅速诊断等特征而被实施于非常多的检查。近年，妊娠检查药等在通常药店出售，即使是通常消费者也可以测定，进而不仅是检查有无检查对象物质的定性检查，而且测定量的定量检查等也能够实现。

作为免疫色谱测定法的测定原理，存在被称为三明治法的方法、被称为竞争法的方法。另外，作为测定形式，存在被称为渗滤(flow through)型、侧向流动(lateral flow)型的方法。作为检样中的检查对象物质，可以检出各种物质，但作为典型例，存在通过三明治法检出抗原的测定，依次实施以下那样的操作。但是不限于这种操作。

(1)将与作为检查对象物质的抗原特异性结合的抗体固定化于硝基纤维素膜等色谱介质的规定部位、在色谱介质的任意位置形成被称为测试线(test line)(以下也称为“TL”)的反应部位。

(2)制造在酶、显色颗粒、荧光显色颗粒、磁性颗粒等标记物质上负载有与检查对象物质特异性结合的配体(例如抗体)而成的检出试剂，将所述检出试剂涂布于结合垫(conjugate pad)等并干燥，形成含有检出试剂的部分，与前述色谱介质组合而形成免疫色谱诊断试剂盒。在此所称的配体指的是与检查对象物质特异性结合的物质，可列举出抗体、抗原、有机分子、蛋白质作为例子。

(3)将含有抗原的检样其本身、或将其用任意液体稀释而成的溶液滴加到前述免疫色谱诊断试剂盒的规定位置、例如样品垫，使抗原和检出试剂在色谱介质上展开。

通过这些操作，在反应部位，被固定化于色谱介质上的抗体可借由抗原而捕捉标记物质，检出标记物质的信号，由此进行利用免疫色谱诊断试剂盒进行的诊断。通常的诊断为仅检查抗原的有无的定性诊断，但是近年通过用肉眼或机械检出该信号的强度，也可以进行定量诊断。

在此，作为在标记物质上负载抗体的方法，大致存在两种。一种为通过化学结合而负载的方法，另一种为物理上吸附、负载于标记物质表面的方法。已知通过化学结合使其负载的方法存在可以有效地使抗体取向的可能性。但是一般而言，基于抗体不同而存在难以化学结合的情况，另外，从处理操作的简便性的观点考虑，为了对应于广泛的检查对象，以物理的方式吸附抗体的颗粒更受到欢迎。其中，作为以物理的方式可以吸附抗体的颗粒，以下的专利文献1中报告了胶体金，以下的专利文献2中报告了着色胶乳。

作为免疫色谱测定法中所要求的需要之一，存在分析灵敏度的改善。这意味着即使是更少的检查对象物质也可以检出。通过分析灵敏度改善，能够迅速诊断，因此分析灵敏度成为重要的因素。本申请发明人等在以下的专利文献3中报告了，作为以物理的方式能够吸附抗体的显色颗粒，使用颜色浓、粒径大的纤维素颗粒，由此能够改善分析灵敏度。