[发明专利]用于细胞遗传修饰的非整合型DNA载体

权利要求书

1.一种包含至少一个启动子和S/MAR元件的多核苷酸，其中所述S/MAR元件位于所述启动子的下游，并且其中所述S/MAR元件的核酸序列(S/MAR序列)在至多200个核苷酸的片段上，每100个核苷酸包含至少3个序列基序ATTA(SEQ ID NO：1)。

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述S/MAR元件两侧是剪接供体和剪接受体。

3.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸还包含编码多肽、优选编码选择性标志物的编码序列，其中所述编码多肽的编码序列介于所述启动子和所述S/MAR元件之间。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸还包含编码选择性标志物的编码序列(选择性标志物序列)，所述选择性标志物序列介于所述启动子和所述S/MAR元件之间，其中所述启动子和所述选择性标志物序列共同构成选择性标志物基因，其中所述选择性标志物是真核细胞的选择性标志物。

5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述选择性标志物基因是抗嘌呤霉素基因、抗杀稻瘟素基因、抗新霉素基因或抗博来霉素基因，优选抗嘌呤霉素基因。

6.根据权利要求2至5中任一项所述的多核苷酸，其中由所述启动子转录转录物，从所述转录物中剪接出S/MAR元件的序列。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸还包含细菌复制起点和/或细菌选择性标志物基因，其中所述细菌复制起点和/或细菌选择性标志物基因通过至少一种隔绝元件的存在与多核苷酸中包含的其余序列隔绝。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸缺乏猿猴病毒40(SV40)复制起点、牛乳头瘤病毒(BPV)复制起点和EB病毒(EBV)复制起点。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸在宿主细胞中附加体型复制，优选其中附加体型复制是稳定的附加体型复制，优选在哺乳动物中。

10.一种包含根据权利要求1至9中任一项所述的多核苷酸的组合物，优选其中所述组合物是药物组合物。

11.一种包含根据权利要求1至9中任一项所述的多核苷酸的宿主细胞，优选地，其中所述宿主细胞是CD34+祖细胞；CD61+血小板；CD19+B淋巴细胞；CD14+单核细胞；CD15+粒细胞；CD3+细胞毒性T淋巴细胞，优选对CD8和CD45也呈阳性；CD3+辅助性T淋巴细胞，优选对CD4和CD45也呈阳性；CD3+激活的T淋巴细胞，优选对CD25和CD45也呈阳性，肿瘤浸润淋巴细胞或自然杀伤(NK)细胞。

12.根据权利要求1至9中任一项所述的多核苷酸、根据权利要求10所述的组合物和/或根据权利要求11所述的宿主细胞，其用于医药用途，优选用于治疗遗传疾病。

13.一种包含根据权利要求1至9中任一项所述的多核苷酸和介导细胞进入的化合物的试剂盒。

14.一种包含根据权利要求1至9中任一项所述的多核苷酸、根据权利要求10所述的组合物和/或根据权利要求11所述的宿主细胞的装置。

15.一种用于稳定地转染宿主细胞的方法，其包括

a)使所述宿主细胞与根据权利要求1至9中任一项所述的多核苷酸和/或根据权利要求10所述的组合物和/或根据权利要求11所述的宿主细胞接触，和

b)从而稳定地转染宿主细胞。