[发明专利]类视黄醇的生物合成

权利要求书

1.一种产生类胡萝卜素的宿主细胞，特别是真菌宿主细胞，所述宿主细胞包含：

(a)立体选择性β-胡萝卜素氧化酶(BCO)，所述宿主细胞产生包含顺式视黄醛和反式视黄醛的视黄醛混合物，其中由所述宿主细胞产生的所述混合物中反式视黄醛的百分比是至少约65％，优选68％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或至多100％；以及

(b)乙酰转移酶(ATF)[EC 2.3.1.84]，优选地具有乙酰转移酶1(Atf1)活性的酶，所述酶催化视黄醇，优选地反式视黄醇转换为视黄醇乙酸酯混合物，其中基于由所述宿主细胞产生的类视黄醇的总量，至少10％的百分比是乙酰化的视黄醇，即视黄醇乙酸酯。

2.根据权利要求1所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，其中所述乙酰转移酶[EC2.3.1.84]，优选地具有乙酰转移酶1活性的酶，催化视黄醇转换为视黄醇乙酸酯混合物，其中所述混合物包含至少约65％，优选68％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或至多100％的反式同种型视黄醇乙酸酯，诸如至少65-90％的反式同种型视黄醇乙酸酯。

3.根据权利要求1或2所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，所述宿主细胞还包含优选异源的视黄醇脱氢酶(RDH)[EC 1.1.1.105]，所述RDH能够将视黄醛转换为视黄醇，总转换率为至少约90％朝向视黄醇生成，优选地选自真菌，更优选地选自镰刀菌属(Fusarium)，诸如与根据SEQ ID NO:19的多肽具有至少60％同一性的多肽。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，所述宿主细胞还包含对内源性酰基转移酶活性的修饰，其中已经降低或消除了所述内源性酰基转移酶活性，优选地[EC 2.3.1]活性，更优选地酰基转移酶[EC 2.3.1.20]活性。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，其中所述BCO选自真菌、植物或动物，优选地选自镰刀菌属、黑粉菌属(Ustilago)、番红花属(Crocus)、果蝇属(Drosophila)、短担尼鱼属(Danio)、真鮰属(Ictalurus)、狗鱼属(Esox)、矛尾鱼属(Latimeria)，更优选地选自藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)、玉米黑粉菌(Ustilagomaydis)、番红花(Crocus sativus)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)、斑马鱼(Daniorerio)、斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)、白斑狗鱼(Esox lucius)、矛尾鱼(Latimeriachalumnae)，甚至更优选地选自与根据SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:7的多肽具有至少约60％同一性的多肽或与根据SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:17的多肽序列具有至少约50％同一性的多肽。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，其中所述乙酰转移酶选自植物，动物，包括人，藻类，真菌，包括酵母，或细菌，优选地选自酵母属(Saccharomyces)、草莓属(Fragaria)、埃希氏菌属(Escherichia)、卫矛属(Euonymus)、苹果属(Malus)、矮牵牛属(Petunia)或拉茜斯酵母属(Lachancea)，更优选地选自与根据SEQID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQID NO:33、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:38的多肽具有至少约60％同一性的多肽。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，所述宿主细胞产生视黄醇乙酸酯混合物，所述视黄醇乙酸酯混合物包含至少约65％，优选地68％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或至多100％的反式视黄醇乙酸酯同种型，诸如至少65-90％的反式视黄醇乙酸酯同种型。