[发明专利]与TB7.7特异性结合的DNA适体及其用途

说明书

本发明涉及一种与7.7kDa结核特异性抗原(TB7.7)特异性结合的DNA适体；一种用于诊断结核的生物传感器，其包括所述DNA适体；以及一种用于提供用于诊断结核的信息的方法。本发明人发现，根据本发明的DNA适体不仅具有与TB7.7蛋白的特异性结合潜能，而且结合亲和力也优异。因此可以预期，本发明的DNA适体在使用时比使用抗体的常规ELISA方法表现出更大的稳定性。因此，该适体预期有益地应用于开发用于诊断结核的组合物、用于诊断结核的生物传感器以及用于提供用于诊断结核的信息的方法。

技术领域

本发明涉及用于蛋白检测的适体，更具体地，涉及与已知在结核分枝杆菌H37Rv中表达的7.7kDa结核特异性抗原(TB7.7)特异性结合的DNA适体。

背景技术

结核是由结核分枝杆菌感染导致的常见致命疾病。结核的症状包括由于厌食、高烧和伴有血痰的咳嗽引起的突然的体重减轻。诊断方法包括X射线检查、痰液涂片检查和聚合酶链反应(PCR)，最后通过它们的组合来诊断结核。众所周知，结核在包括非洲地区在内的发展中国家经常发生，最近被认为是一种已根除的疾病。但是，根据世界卫生组织的统计数据，这是一种可怕的疾病，在2015年全球死亡致因中排名前10位，尤其是，韩国在结核发病率和死亡率方面以压倒性的数量位居经合组织(OECD)国家之首。因此，韩国制定了国家结核管控指南，最大的问题是潜伏性结核的诊断，潜伏性结核患者的人数估计为20亿，相当于世界人口的三分之一。10％的潜伏性结核发展为活动性结核，在其症状发作之前进行早期诊断和治疗很重要。

当前，潜伏性结核的诊断基于两种测试：结核菌素皮肤测试(TST)和干扰素-γ释放测定(IGRA)。TST至少需要48小时到72小时，并且可能会因BCG疫苗接种或感染非结核分枝杆菌而显示假阳性结果。IGRA是一种间接诊断方法，其中将患者的血液添加到附着有结核分枝杆菌特异性抗原的管中，接着刺激16小时，然后测量干扰素-γ的分泌。与TST相比，由于使用了结核分枝杆菌特异性抗原，假阳性结果的概率很低，但是考虑到结核的流行地区大多炎热或潮湿，缺乏稳定性便是一个缺点。另外，通过在血液中的刺激间接测量干扰素-γ的分泌，因此存在诸如敏感性降低之类的缺点。

同时，TB7.7也称为Rv2654c并且已知在结核分枝杆菌H37Rv中表达，这导致尤其对人类致命的结核。目前尚不确切知道在感染期间诱发宿主疾病的机制，但通过IGRA推测TB7.7与ESAT6形成复合物，该复合物被用作针对干扰素-γ分泌的结核分枝杆菌特异性抗原，以介导Th1细胞免疫应答。

适体是对特定物质具有高特异性和亲和力的单链DNA(ssDNA)或RNA，由于对特定物质的亲和力非常高且稳定，近来已得到积极开发，并且其在治疗剂和诊断传感器中的应用在积极进行中(参见韩国专利登记号10-1279585)。适体可以使用相对简单的方法合成，并且可以靶向细胞、蛋白，甚至靶向小的有机物，因此有可能开发使用适体的新型检测方法，并且由于与先前开发的抗体相比，其特异性和稳定性更高，有可能将其应用于治疗剂、药物递送系统和诊断性生物传感器的开发，因此，继续对其进行研究。

发明内容

技术问题

由于付出了巨大的努力来开发能够替代针对7.7kDa结核特异性抗原(TB7.7)的抗体的适体，本发明的发明人生产了对TB7.7蛋白具有特异性结合能力的DNA适体，从而基于该发现完成了本发明。

因此，本发明的目的是提供一种与7.7kDa结核特异性抗原(TB7.7)特异性结合的DNA适体，其中DNA适体由SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的核苷酸序列组成。

本发明的另一个目的是提供一种用于诊断结核的组合物，其包括DNA适体。

本发明的又一个目的是提供一种用于诊断结核的生物传感器，其包括对7.7kDa结核特异性抗原(TB7.7)具有特异性的DNA适体；以及其上固定有DNA适体的板，其中DNA适体由SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的核苷酸序列组成。