[发明专利]胰高血糖素样肽的制备方法

权利要求书

1.一种用于制备胰高血糖素样肽(GLP)或其类似物或变体的方法，所述方法包括在溶液中偶联至少第一片段和至少第二片段，其中所述偶联包括使所述第一片段的羧基末端氨基酸与所述第二片段的氨基末端氨基酸反应，并且其中所述第一片段的羧基末端氨基酸不为Gly残基。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一片段的羧基末端氨基酸为Ala残基。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一片段的羧基末端氨基酸为Gln残基。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一片段的羧基末端氨基酸为Leu残基。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一片段的羧基末端残基为氨基酸酯或氨基酸酰胺。

6.根据权利要求5所述的方法，其中氨基酸酯基团选自三苯甲基类基团、二苯甲基类基团和叔丁基基团。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述胰高血糖素样肽为GLP-1肽或其类似物或变体。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述GLP-1肽或其类似物或变体为利拉鲁肽或其类似物或变体。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述GLP-1肽或其类似物或变体具有SEQ ID NO：1：

并且所述方法包括：

(i)在溶液中，将第一肽与第二肽偶联，所述第一肽具有以下序列：

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala[SEQ ID NO：2]

其中：

His的N末端任选地被保护基团保护，所述保护基团优选Boc或Fmoc；并且

Ala羧酸基团任选地为活化羧酸衍生物的形式；

所述第二肽具有以下序列：

Lys(Pal-Glu-OX)-Glu-Phe-lle-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH[SEQ ID NO:3]

其中：

X为H或Glu羧酸基团的保护基团；

并且其中所述第一肽和第二肽中的一个或以上氨基酸残基可为未经保护的或经保护的，优选用酸可裂解的保护基团进行保护；

(ii)任选地，除去任意保护基团；

(iii)任选地，纯化所述GLP-1肽。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述第一肽具有下式：P1-His(P)-Ala-Glu(P)-Gly-Thr(P)-Phe-Thr(P)-Ser(P)-Asp(P)-Val-Ser(P)-Ser(P)-Tyr(P)-Leu-Glu(P)-Gly-Gln(P)-Ala-Ala-O-P2[SEQ ID NO:4]

其中：

P1为His的N末端的保护基团(优选Boc或Fmoc)；

各个P代表侧链保护基团，所述侧链保护基团可相同或不同；并且

P2为H或Ala残基的活化羧酸酯(优选Su、Bt或Pfp)。