[发明专利]用于从微生物发酵纯化中性母乳寡糖（HMO）的方法

权利要求书

1.一种用于从发酵液中纯化中性母乳寡糖(HMO)的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)从所述发酵液分离生物质以提供粗溶液；

(ii)用以下项处理所述粗溶液：

(a)阳离子交换材料；

(b)阴离子交换材料；和

(c)阳离子交换吸附树脂；

从而获得含有所述中性母乳寡糖的经纯化的溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述中性母乳寡糖选自由以下组成的组：2’-岩藻糖基乳糖(2'-FL)、3-岩藻糖基乳糖(3-FL)、乳糖-N-四糖(LnT)、6’-半乳糖基乳糖和3’-半乳糖基乳糖。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中，步骤(ii)(a)中的所述阳离子交换材料为强酸性阳离子交换材料，优选为选自由凝胶型苯乙烯/二乙烯基苯阳离子交换树脂组成的组的强酸性阳离子交换材料，更优选为具有苯乙烯/二乙烯基苯凝胶型基质和磺酸官能团的强酸性阳离子交换树脂。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，步骤(ii)(b)中的所述阴离子交换材料为弱碱性阴离子交换材料，优选为选自由交联丙烯酸基阴离子交换树脂组成的组的弱碱性阴离子交换材料，更优选为具有叔胺官能团的凝胶型交联丙烯酸基阴离子交换树脂。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，步骤(ii)(c)中的所述阳离子交换吸附树脂具有苯乙烯/二乙烯基苯共聚物基质和磺酸官能团、约0.8至1.2ml/g的孔隙度和≥600m²/g的平均表面积。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在步骤(ii)中，首先用所述阳离子交换材料、其后用所述阴离子交换材料并且其后用所述吸附树脂处理所述粗溶液。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，步骤(i)包括：

(a)微滤(MF)；和

(b)用具有5kDa或更小的截留分子量的膜使MF渗透物经受超滤。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，步骤(b)中的所述超滤用具有3kDa或更小、优选3kDa的截留分子量的膜进行。

9.根据权利要求7或8中任一项所述的方法，其中，步骤(a)中的所述微滤是在20℃-75℃范围内、优选在30℃-70℃范围内、特别是在40℃-50℃范围内或在60℃-70℃范围内的温度下进行。

10.根据权利要求7-9中任一项所述的方法，其中，使步骤(i)(a)的MF渗透物在步骤(i)(b)之前经受热处理。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括：使已经在步骤(ii)中获得的所述经纯化的溶液经受纳滤或反渗透。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，使已经在步骤(ii)中获得的所述经纯化的溶液-任选在一个或多个进一步处理步骤之后-经受(iii)干燥或结晶步骤。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，在步骤(iii)中，通过喷雾干燥来干燥所述经纯化的溶液。

14.根据权利要求13或14所述的方法，其中，所述中性母乳寡糖以粉末形式获得，所述粉末基于干物质具有小于10wt.％、优选小于8wt.％、更优选小于5wt.％的水含量，并且具有90wt.％或更高、优选92wt.％或更高、更优选94wt.％或更高的纯度。

15.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述中性母乳寡糖以糖浆形式获得。