[发明专利]通过质谱法进行的载脂蛋白E同种型检测

说明书

提供了通过质谱法确定样品中载脂蛋白E(ApoE)表型的方法；其中由通过质谱法检测到的离子身份确定样品中存在的ApoE的等位基因(一种或多种)。在另一方面，本文提供了用于诊断或预后阿尔茨海默氏病或痴呆的方法。

技术领域

本发明涉及载脂蛋白E的检测或定量。在具体方面，本发明涉及通过质谱法检测载脂蛋白E或其等位基因的方法。

背景技术

阿尔茨海默氏病是影响老年人群的最常见的痴呆形式。阿尔茨海默氏病的特征在于认知能力具体地是记忆和学习能力的逐渐衰退。载脂蛋白E(APOE)与发生阿尔茨海默氏病的明显增加相关联。人类APOE基因具有三个多态等位基因ε2、ε3和ε4，它们导致六种不同的表型：ε2/ε2、ε2/ε3、ε3/ε3、ε2/ε4、ε3/ε4和ε4/ε4。

目前用于预测或诊断阿尔茨海默氏病的临床诊断方法的准确度和灵敏度较低。需要用于检测载脂蛋白E的准确和灵敏的测定。具体地，需要用于检测多种同工型(isoform)的准确和灵敏的测定。

发明内容

本文提供了通过包括串联质谱法在内的质谱法检测或确定样品中载脂蛋白E(APOE)的量的方法。

在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定载脂蛋白E的量，其包括：(a)纯化样品中的载脂蛋白E；(b)电离样品中的载脂蛋白E；(c)通过质谱法检测或确定载脂蛋白E离子(一种或多种)的量；其中载脂蛋白E离子(一种或多种)的量与样品中载脂蛋白E的量有关。

在某些实施方式中，本文提供的方法用于确定样品中载脂蛋白E(ApoE)表型，所述方法包括：(a)纯化样品中的ApoE；(b)电离样品中的ApoE以产生一种或多种ApoE离子；(c)通过质谱法检测来自步骤(b)的离子(一种或多种)；其中样品中存在的ApoE等位基因(一种或多种)由步骤(c)中检测到的离子的身份来确定。

在一些实施方式中，本文提供的纯化包括液相色谱法。在一些实施方式中，液相色谱包括高效液相色谱法(HPLC)。

在一些实施方式中，样品中的ApoE被消化。在一些实施方式中，ApoE被胰蛋白酶消化。在一些实施方式中，被消化的ApoE是微波处理的。在一些实施方式中，通过快速酶消化微波技术消化ApoE。

在一些实施方式中，本文提供的纯化包括固相萃取(SPE)。

在一些实施方式中，电离包括电喷雾电离(ESI)。在一些实施方式中，电离包括以正模式电离。在一些实施方式中，电离包括以负模式电离。

在一些实施方式中，本文提供的方法进一步包括添加内标。在一些实施方式中，内标是同位素标记的。

在一些实施方式中，通过本文提供的方法确定的表型是ApoE2/ApoE2。在一些实施方式中，表型是ApoE2/ApoE3。在一些实施方式中，表型是ApoE2/ApoE4。在一些实施方式中，表型是ApoE3/ApoE3。在一些实施方式中，表型是ApoE3/ApoE4。在一些实施方式中，表型是ApoE4/ApoE4。