[发明专利]通过质谱法检测和定量胍基乙酸、肌酸和肌酐

说明书

提供了通过质谱法检测或确定胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的量的方法。

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2017年8月14日提交的美国临时申请62/545,349的权益，其全部内容通过引用并入本文。

背景技术

以L-精氨酸：甘氨酸脒基转移酶(AGAT)、胍基乙酸甲基转移酶(GAMT)和X-连锁肌酸转运蛋白(SLC6A8)的缺陷为特征的三种人类障碍引起脑肌酸缺乏综合征(CCDS)。由于呈现的临床特征(例如，精神运动迟缓、生长迟缓、智力障碍、癫痫、自闭症行为、痉挛和运动异常)是非特异性特征，因此它们是诊断不足的。在AGAT和GAMT中口服补充肌酸可纠正大脑肌酸含量。诊断取决于尿液和血浆中胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的测量。尿液或血浆中这些个体分析物浓度的升高或降低可以区分这三种疾病。

需要对胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐进行准确而灵敏的测定。

发明内容

本文提供了通过质谱法(包括串联质谱法)检测或确定样品中胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的量的方法。

在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的量，其包括：(a)纯化样品中的GAA、肌酸和肌酐；(b)电离样品中的GAA、肌酸和肌酐；(c)通过质谱法检测或确定GAA、肌酸和肌酐离子(一种或多种)的量；其中GAA、肌酸和肌酐离子(一种或多种)的量与样品中GAA、肌酸和肌酐的量有关。

在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定胍基乙酸(GAA)的量，其包括：(a)纯化样品中的GAA；(b)电离样品中的GAA；(c)通过质谱法检测或确定GAA离子(一种或多种)的量；其中GAA离子(一种或多种)的量与样品中GAA的量有关。

在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定肌酸的量，其包括：(a)纯化样品中的GAA、肌酸和肌酐；(b)电离样品中的肌酸；(c)通过质谱法检测或确定肌酸离子(一种或多种)的量；其中肌酸离子(一种或多种)的量与样品中肌酸的量有关。

在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定肌酐的量，其包括：(a)纯化样品中的肌酐；(b)电离样品中的肌酐；(c)通过质谱法检测或确定肌酐离子(一种或多种)的量；其中肌酐离子(一种或多种)的量与样品中肌酐的量有关。

在一些实施方式中，在质谱法之前，胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐是未衍生化的。

在一些实施方式中，样品是尿液或血清或血浆。在优选的实施方式中，样品是尿液。在一些实施方式中，样品是全血。在一些实施方式中，样品是唾液。

在一些实施方式中，本文提供的纯化包括液相色谱法。在一些实施方式中，液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。

在一些实施方式中，本文提供的纯化包括固相萃取(SPE)。

在一些实施方式中，电离包括电喷雾电离(ESI)。在一些实施方式中，电离包括以正模式电离。在一些实施方式中，电离包括以负模式电离。

在一些实施方式中，本文提供的方法进一步包括添加内标。在一些实施方式中，内标是同位素标记的。

在某些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于1mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.9mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.8mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.7mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.6mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.5mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.4mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.3mg/L。