[发明专利]用于递送PKLR以治疗丙酮酸激酶缺乏症的慢病毒载体

权利要求书

1.一种用于丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的表达盒，所述表达盒包括多核苷酸序列，所述多核苷酸序列按以下5'到3'顺序包括：

a)启动子序列，和

b)对人PKLR基因产物进行编码的密码子优化的序列；

其中所述启动子序列与所述对人PKLR基因产物进行编码的密码子优化的序列可操作地连接，并且

其中所述对人PKLR基因产物进行编码的密码子优化的序列与SEQ ID NO:8共享至少95％同一性。

2.根据权利要求1所述的表达盒，其中所述启动子是磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的表达盒，其进一步包括突变的土拨鼠肝炎病毒的转录后调节元件(wPRE)。

4.根据权利要求3所述的表达盒，其中所述突变的wPRE是包括与SEQ ID NO:24具有至少99％同一性的序列的嵌合wPRE。

5.根据权利要求1到4中任一项所述的表达盒，其进一步包括聚嘌呤段(PPT)。

6.根据权利要求1到5中任一项所述的表达盒，其进一步包括聚腺苷酸化(polyA)信号序列。

7.根据权利要求1到6中任一项所述的表达盒，其中所述表达盒与SEQ ID NO:26共享至少95％同一性。

8.根据权利要求7所述的表达盒，其中所述表达盒与SEQ ID NO:26共享至少99％同一性。

9.一种重组基因递送载体，其包括根据权利要求1到8中任一项所述的表达盒，其中所述重组基因递送载体是慢病毒载体。

10.根据权利要求9所述的重组基因递送载体，其按5'到3'顺序包括以下序列：

a)5'LTR，任选地经过修饰的5'LTR；

b)HIV-1ψ序列；

c)RRE；

d)cPPT/CTS序列；

e)PGK启动子序列，任选地人PGK启动子序列；

f)对人PKLR基因产物进行编码的密码子优化的序列，所述对人PKLR基因产物进行编码的密码子优化的序列与SEQ ID NO:8具有至少99％同一性；

g)突变wPRE序列，所述突变wPRE序列与SEQ ID NO:24具有至少100％同一性；

i)经过修饰的3'LTR；

j)SV40 poly(A)信号；

k)SV40复制起点(ori)；

u)CMV增强子序列；以及

v)CMV启动子序列。

11.根据权利要求9所述的重组基因递送载体，其中所述重组基因递送载体是治疗性基因递送载体。

12.根据权利要求11所述的重组基因递送载体，其中所述重组基因递送载体能够在临床应用中实现长期稳定性和安全性。

13.一种细胞，其包括根据权利要求1到8中任一项所述的表达盒或根据权利要求9到12中任一项所述的重组基因递送载体。

14.根据权利要求13所述的细胞，其中所述细胞是造血干细胞。

15.根据权利要求14所述的细胞，其中所述细胞是定向造血红系祖细胞。

16.一种药物组合物，其包括药学上可接受的赋形剂和根据权利要求9到12中任一项所述的重组基因递送载体或根据权利要求13到15中任一项所述的细胞。

17.一种治疗或预防有需要的受试者的丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的方法，其包括向所述受试者提供根据权利要求16所述的药物组合物。