[发明专利]WNT组合物和从无血清培养条件进行的工艺方法

权利要求书

1.一种制备功能活性Wnt多肽的方法，所述方法包括：

a)在条件培养基中在细胞中共表达Wnt多肽和伴侣蛋白以产生多个Wnt多肽-伴侣蛋白复合物；

b)从所述条件培养基收集所述多个Wnt多肽-伴侣蛋白复合物；

c)使所述多个Wnt多肽-伴侣蛋白复合物与包含糖清洁剂的缓冲液一起孵育以产生包含第一Wnt组合物和伴侣蛋白组合物的混合物，所述第一Wnt组合物包含功能非活性Wnt多肽；

d)用固定有磺化多芳族化合物的管柱使所述第一Wnt组合物从所述混合物分离以产生第二Wnt组合物，所述第二Wnt组合物包含所述功能活性Wnt多肽和所述糖清洁剂；和

e)使所述第二Wnt组合物与脂质体的水溶液接触以产生最终Wnt组合物，所述最终Wnt组合物包含功能活性Wnt多肽。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述糖清洁剂包括葡萄糖苷清洁剂。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述葡萄糖苷清洁剂是正己基-β-D-吡喃葡萄糖苷、正庚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、正辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷、正辛基-α-D-吡喃葡萄糖苷、辛基β-D-1-硫代吡喃葡萄糖苷、正辛基-β-D-吡喃半乳糖苷、正壬基-β-D-吡喃葡萄糖苷、正癸基-β-D-吡喃葡萄糖苷、正十二基-β-D-吡喃葡萄糖苷或甲基-6-O-(N-庚基氨基甲酰基)-α-D-吡喃葡萄糖苷。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述葡萄糖苷清洁剂选自正辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷和辛基β-D-1-硫代吡喃葡萄糖苷。

5.如权利要求2所述的方法，其中所述葡萄糖苷清洁剂是正辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷。

6.如权利要求2所述的方法，其中所述葡萄糖苷清洁剂是辛基β-D-1-硫代吡喃葡萄糖苷。

7.如权利要求2所述的方法，其中所述糖清洁剂包括麦芽糖苷清洁剂。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述麦芽糖苷清洁剂是正癸基-β-D-吡喃麦芽糖苷、正十二基-β-D-吡喃麦芽糖苷或6-环己基-1-己基-β-D-吡喃麦芽糖苷。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述缓冲液中所述糖清洁剂的浓度是：

约0.1％至约5％w/v；或

约0.1％、0.5％、1％、1.5％或约2％w/v。

10.如权利要求1所述的方法，其中还用包含与抗体的Fc部分相互作用的多肽的亲和色谱管柱、混合模式管柱、尺寸排阻色谱管柱或它们的组合纯化所述第二Wnt组合物至少一次以产生第三Wnt组合物。

11.如权利要求1所述的方法，其中在与所述缓冲液一起孵育以产生包含所述第一Wnt组合物的所述混合物之前，还用包含与抗体的Fc部分相互作用的多肽的亲和色谱管柱纯化所述多个Wnt多肽-伴侣蛋白复合物。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述亲和色谱管柱是蛋白A管柱。

13.如权利要求11所述的方法，其中用包含小于5、小于4或小于3的pH的缓冲液从所述亲和色谱管柱洗脱所述多个Wnt多肽-伴侣蛋白复合物。