[发明专利]WOOD-LJUNGDAHL微生物的基因敲除

权利要求书

1.一种非天然存在的Wood-Ljungdahl细菌，其包括异源性硫解酶和编码NAD依赖性电子分叉[FeFe]-氢化酶、谷氨酸合酶、柠苹酸合酶(citramalate synthase)、乙酰乳酸脱羧酶、乳酸脱氢酶、乙酸激酶、磷酸转乙酰酶和乙醛脱氢酶中的一种或多种的一种或多种基因中的破坏性突变，其中与亲本细菌相比，所述非天然存在的细菌已经通过乙酰乙酰辅酶A提高碳通量。

2.根据权利要求1所述的非天然存在的细菌，其中与所述亲本细菌相比，所述一种或多种基因的表达减少或消除。

3.根据权利要求1所述的非天然存在的细菌，其中所述非天然存在的细菌产生选自由以下组成的组的产物：丙酮、异丙醇、3-羟基异戊酰辅酶A、3-羟基异戊酸盐、异丁烯、异戊烯基焦磷酸盐、二甲基烯丙基焦磷酸盐、异戊二烯、法呢烯、3-羟基丁酰辅酶A、巴豆酰辅酶A、3-羟基丁酸盐、3-羟基丁醛、1,3-丁二醇、2-羟基异丁酰辅酶A、2-羟基异丁酸盐、丁酰辅酶A、丁酸盐、丁醇、己酸盐、己醇、辛酸盐、辛醇、1,3-己二醇、2-丁烯-1-醇、异戊酰辅酶A、异戊酸盐或异戊醇。

4.根据权利要求1所述的非天然存在的细菌，其中所述亲本细菌选自由以下组成的组：伍氏醋酸杆菌(Acetobacterium woodii)、巴氏嗜喊菌(Alkalibaculum bacchii)、黏液真杆菌(Blautia producta)、食甲基丁酸杆菌(Butyribacterium methylotrophicum)、醋酸梭菌(Clostridium aceticum)、产乙醇梭菌(Clostridium autoethanogenum)、食一氧化碳梭菌(Clostridium carboxidivorans)、克氏梭菌(Clostridium coskatii)、德氏梭菌(Clostridium drakei)、蚁酸醋酸梭菌(Clostridium formicoaceticum)、永达尔梭菌(Clostridium ljungdahlii)、马氏梭菌(Clostridium magnum)、拉氏梭菌(Clostridiumragsdalei)、粪味梭菌(Clostridium scatologenes)、粘液真杆菌(Eubacteriumlimosum)、热自养穆尔氏菌(Moorella thermautotrophica)、热醋穆尔氏菌(Moorellathermoacetica)、普氏产醋杆菌(Oxobacter pfennigii)、卵形鼠孢菌(Sporomusa ovata)、森林土壤醋酸鼠孢菌(Sporomusa silvacetica)、球形鼠孢菌(Sporomusa sphaeroides)和凯伍热厌氧菌(Thermoanaerobacter kiuvi)。

5.根据权利要求1所述的非天然存在的细菌，其中所述亲本细菌选自由以下组成的组：产乙醇梭菌、永达尔梭菌和拉氏梭菌。

6.根据权利要求1所述的非天然存在的细菌，其中所述亲本细菌是产乙醇梭菌，并且：

(a)所述NAD依赖性的电子分叉[FeFe]-氢化酶选自由以下组成的组：CAETHG_1576、CAETHG_1578、CAETHG_3569、CAETHG_3570和CAETHG_3571，

(b)所述谷氨酸合酶选自由以下组成的组：CAETHG_0477、CAETHG_1580、CAETHG_3850和CAETHG_3851，

(c)所述柠苹酸合酶是CAETHG_2751，

(d)所述乙酰乳酸脱羧酶是CAETHG_2932，

(e)所述乳酸脱氢酶是CAETHG_1147，

(f)所述乙酸激酶是CAETHG_3359，

(g)所述磷酸转乙酰酶是CAETHG_3358，或者

(h)所述乙醛脱氢酶选自由以下组成的组：CAETHG_1819、CAETHG_3287和CAETHG_1830。