[发明专利]用于新颖抗原结合模块的特异性测试的通用报告细胞测定法

权利要求书

1.一种用于评估抗原结合模块的特异性的方法,其包含下述步骤:

a)提供包含抗原结合域和识别域的抗原结合分子,其中该抗原结合域包含该抗原结合模块,其中该抗原结合模块是对靶抗原特异性的；

b)使该抗原结合分子与在表面上包含该靶抗原的靶细胞接触,特别是其中该靶细胞是癌细胞；

c)使该抗原结合分子与嵌合抗原受体(CAR)表达性报告T(CAR-T)细胞接触,其中该报告CAR-T细胞包含:

i.能够特异性结合该识别域的CAR,其中该CAR与应答元件可操作偶联；

ii.在该应答元件控制下的报告基因；和

d)通过测定该报告基因的表达来测定T细胞激活以建立该抗原结合模块的特异性。

2.权利要求1的方法,其中该识别域是免疫球蛋白域。

3.权利要求1或2任一项的方法,其中该识别域是Fc域。

4.权利要求3的方法,其中该Fc域是突变型Fc域,其中该突变型Fc域与非突变型亲本Fc域相比包含至少一处氨基酸替代,其中该CAR能够特异性结合该突变型Fc域但不能够特异性结合该非突变型亲本Fc域。

5.权利要求4的方法,其中该突变型Fc域包含选自由依照EU编号方式的L234,L235,I253,H310,P331,P329和H435组成的组的位置处的至少一处氨基酸突变,特别是其中该氨基酸突变是L234A,L235A,I253A,N297A,H310A,P329G和/或H435A。

6.权利要求4或5任一项的方法,其中该突变型Fc域包含依照EU编号方式的氨基酸突变P329G。

7.权利要求1至6任一项的方法,其中该抗原结合模块是Fab片段,特别是自噬菌体展示文库筛选衍生的Fab片段。

8.依照权利要求1至7任一项的方法,其中该应答元件的激活导致该报告基因的表达。

9.依照权利要求1至8任一项的方法,其中该报告基因编码绿色荧光蛋白(GFP)或萤光素酶。

10.依照权利要求1至9任一项的方法,其中该靶抗原选自由CD20,CEA,HER2,TYRP,EGFR,MCSP,STEAP1,WT1和FolR1,或其片段组成的组。

11.依照权利要求1至10任一项的方法,其中该靶抗原是与人主要组织相容性复合物(MHC)的分子结合的肽。

12.依照权利要求11的方法,其中该抗原结合模块是T细胞受体样(TCRL)抗原结合模块。

13.依照权利要求1至12任一项的方法,其中在该靶细胞存在下高水平的该报告基因的表达和在该靶细胞缺失下低水平的该报告基因的表达指示该抗原结合模块的高特异性。

14.依照权利要求1至13任一项的方法,其中在该靶细胞存在下高水平的该报告基因的表达和在该靶细胞缺失下低水平的该报告基因的表达指示包含该抗原结合模块的T细胞双特异性(TCB)抗体的高特异性。

15.一种用于生成TCB抗体的方法,其中该TCB抗体包含对靶抗原特异性的第一抗原结合模块和能够特异性结合T细胞激活性受体的第二抗原结合模块,其中该第一抗原结合模块是依照权利要求1至14任一项的方法选择的。