[发明专利]从单特异性抗体生成多特异性抗体的方法

权利要求书

1.一种用于产生多肽的方法，包括以下步骤：

-孵育

第一多聚体，其包含

a-1)第一多肽，其包含

i)免疫球蛋白G CH3结构域，

和

ii)至少一个有功能结合位点或其部份，

和

a-2)第二多肽，其包含

免疫球蛋白G CH3结构域，

其中

a-3)第一多肽的CH3结构域包含突变杵-cys并且第二多肽的CH3结构域包含突变臼，

或

第一多肽的CH3结构域包含突变臼-cys并且第二多肽的CH3结构域包含突变杵，

a-4)第二多肽在CH3结构域中包含突变，所述突变与a-3)下的突变不同并且增加第一多聚体的CH3-CH3结合自由能，

和

第二多聚体，其包含

b-1)第三多肽，其包含

i)免疫球蛋白G CH3结构域，

和

b-2)第四多肽，其包含

i)免疫球蛋白G CH3结构域，

和

ii)至少一个有功能结合位点或其部份

其中

b-3)如若第一多肽包含突变臼-cys，则第四多肽包含突变杵-cys并且第三多肽包含突变臼，

或

如若第一多肽包含突变杵-cys，则第四多肽包含突变臼-cys并且第三多肽包含突变杵，

b-4)第三多肽在CH3结构域中包含突变，所述突变与a-3)、a-4)和b-3)下的突变不同并且增加第二多聚体的CH3-CH3结合自由能，

以形成包含第二和第三多肽的第三多聚体和包含第一和第四多肽的第四多聚体，

和

-回收第四多聚体并因而产生所述多肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其中a-4)下的突变是E357K，第一多肽在位置370包含氨基酸残基K，b-4)下的突变是K370E，并且第四多肽在位置357包含氨基酸残基E，诸位置根据Kabat EU索引编号。

3.根据权利要求1所述的方法，其中a-4)下的突变是D356K，第一多肽在位置439包含氨基酸残基K，b-4)下的突变是K439E，并且第四多肽在位置356包含氨基酸残基D，诸位置根据Kabat EU索引编号。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中第一和/或第二多肽包含氨基酸序列HTSPPSP(SEQ ID NO:85)或氨基酸序列HTPAPE(SEQ ID NO:86)，并且其中第四和/或第三多肽包含氨基酸序列HTSPPSP(SEQ ID NO:85)或氨基酸序列HTPAPE(SEQ ID NO:86)。