[发明专利]细胞分析或与细胞分析有关的改进

说明书

本发明提供了一种用于细胞分析的方法，该方法包括：制备血液样品，该血液样品包含具有表面、细胞质或核抗原(标志物)的有核细胞；采用抗体染色细胞标志物；固定和透化细胞；采用FISH探针与细胞染色体杂交；对细胞进行成像流式细胞术处理；分析通过进行成像流式细胞术处理获得的数据；以及根据数据分析诊断、预测或监测医疗状况。

技术领域

本发明涉及细胞分析。在特定的非限制性方面，本发明涉及用于组织样品和/或细胞分析的诊断和预后方法。例如，本发明提供了用于医学状况或治疗状况的诊断、预后或监测的分析方法。

背景技术

背景技术的以下讨论仅旨在促进对本发明的理解。讨论并不是承认在申请的优先权日之前，所提到的任何材料是或曾经是公知常识的一部分。

细胞遗传学分析是许多疾病如恶性肿瘤、染色体数目异常的综合征(如21三体性疾病(唐氏综合征))和移植受体嵌合症评估中不可或缺的组成部分。

诊断实验室当前使用玻片(细胞涂片或组织切片)上的细胞的荧光原位杂交(FISH)分析来鉴定特定的基因组缺陷。FISH基于荧光标记的单链DNA探针与目标基因组中的互补序列退火，以检测DNA序列和亚微观遗传变化。探针设计用于靶向染色体基因座(区域)，以识别间期和中期全细胞的重排、缺失和获得。由于荧光显微镜用于检查与染色体结合的荧光探针的位置，因此限制了所分析细胞的数量(每个病例通常少于500个)。因此，该方法的灵敏度低。此外，尽管用于观察细胞染色体异常的FISH方法对于恶性疾病(特别是血液恶性肿瘤)和非恶性疾病(例如遗传性疾病的产前诊断)的诊断评估非常重要，但是它是劳动密集型的，并且没有明确识别目标细胞-仅显示细胞核，并且这些细胞核可以源自任何细胞类型。

当与目标细胞的表型鉴定(免疫表型)结合，即细胞抗原加FISH的整合免疫荧光标记结合时，基于玻片的FISH的特异性可以增加。这种组合被称为“immunoFISH”或“荧光免疫表型和相间细胞遗传学，作为研究肿瘤的工具(FICTION)”。ImmunoFISH/FICTION是基于可在细胞离心机制备物、细胞涂片或组织切片上进行的表型鉴定细胞遗传异常的有用工具，以检测通过表型鉴定的细胞(例如CD138阳性浆细胞)的特定遗传异常(图1)。这也使得能够通过表型(克隆异质性)区分存在于所有赘生性细胞中的原发性遗传异常(例如MYC易位)和存在于细胞亚群中的继发性变化。尽管免疫表型和遗传分析的结合(即FICTION)提高了FISH检测染色体异常的特异性，该方法仍然需要荧光显微镜来手动检查与染色体结合的荧光探针的位置，从而限制了所分析细胞的数量(按照FISH)。因此，该方法的灵敏度仍然很低。

相反，通过常规流式细胞术进行的免疫表型分析是一种自动的细胞表型分析方法，其分析了数千个细胞，提供了定量的群体数据并允许检测异常的细胞群体。但是，直到最近，这种方法还不能用于检测FISH探针的结合(图1)。

最近，已经对“悬浮的”细胞，即“FISH-IS”、“悬浮-FISH”或“S-FISH”细胞进行了FISH并通过流式细胞仪进行了分析。FISH-IS保留完整的细胞，并解决了在玻片上进行FISH的空气干燥过程时，原来的3维(或球形)相间核变平的问题。测试原理相同，但是杂交步骤与玻片的规程不同，因为细胞和DNA必须保持完整，同时杂交条件的严格性确保探针标记具有特异性。可以通过流式细胞仪分析相间FISH-IS标记的全细胞，与基于显微镜的方法相比，能够自动对数个细胞进行遗传分析。但是，它可以执行的FISH分析类型受到限制。