[发明专利]一种提高胎儿血红蛋白表达的方法

权利要求书

1.一种通过CRISPR/Cas9系统体外高效编辑造血干细胞的方法，包括将靶向从CTTCCT序列上游0-15个核苷酸至该CTTCCT序列下游0-15个核苷酸的BCL11A基因组区域的sgRNA导入造血干细胞，该BCL11A基因组区域位于chr2:60495236至chr2:60495271之间，其中该sgRNA的5’端前一个、二个和/或三个碱基和/或3’端最后一个碱基是经过2’-O-甲基类似物修饰的，其中通过电转方法将该sgRNA与Cas9编码核苷酸共同导入所述造血干细胞，并且该sgRNA包含SEQ ID NO：4所示的序列。

2.权利要求1的方法，其中所述电转条件为200-600V，0.5ms-2ms。

3.一种体外制造通过基因改造使胎儿血红蛋白(HbF)表达升高的成熟红细胞或其前体细胞的方法，该方法包括：

(a)使用权利要求1~2中任一权利要求所述的方法得到基因改造的造血干细胞；

(b)使用造血干细胞红系扩增和分化培养基对所述基因改造的造血干细胞进行造血干细胞红系扩增和分化，

其中，所述造血干细胞红系扩增和分化培养基包括基础培养基，以及生长因子的组合物，其中所述生长因子的组合物包括干细胞生长因子（SCF）；白介素3（IL-3）和促红细胞生成素（EPO）。

4.根据权利要求3所述的方法，该方法还包括：

使用红系分化脱核培养基进行造血干细胞红系分化脱核，

所述红系分化脱核培养基包含基础培养基、生长因子、以及孕酮受体和糖皮质激素受体的拮抗剂和/或抑制剂。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述红系分化脱核培养基中的生长因子包括促红细胞生成素（EPO），所述孕酮受体和糖皮质激素受体的拮抗剂和/或抑制剂为选自下述化合物(I)~(IV)中的任一种或两种及以上：

。