[发明专利]一种对抗动物增生性肠病的重组疫苗

说明书

本发明涉及一种对抗胞内劳森氏菌的重组疫苗，其基于所述细菌的膜蛋白和侵袭素的重组合成嵌合变体。另外，本发明还公开了编码所述蛋白变体的合成核苷酸序列，重组蛋白，所述合成蛋白抗原的表达盒，转化细胞以及产生所述抗原的方法，证明了其对病原体胞内劳森氏菌的抗原性和保护潜力。

技术领域

本发明涉及兽药技术领域，具体地说，本发明提供了一种对抗由胞内劳森氏菌细菌引起的动物增生性肠病的重组疫苗。

背景技术

限制生猪生产的因素有很多，其中最重要的是疾病。增生性肠病(PE)是一种影响各种哺乳动物，主要是猪的肠道的病理学疾病，影响着世界范围内的工业。这种疾病的特征是小肠粘膜增厚，是由于胞内劳森氏细菌的增生所致。

感染这种细菌的猪有体重减轻、生长迟缓、出血性腹泻等症状，甚至导致死亡。这给智利乃至世界的养猪业带来了巨大的经济损失和相应的健康风险。最近的研究分析了这种疾病的流行率，指出在美国和欧洲，这种疾病的发病率可以达到猪的60％到100％(Machuca,M.A.等人(2017).30头阿根廷猪群内劳森氏菌感染的血清学和组织病理学调查.巴西兽医病理学杂志,2(1),8-11)。

关于细胞内劳森氏菌发病机理的研究，尚不清楚诱导感染动物肠细胞增生的机制，胞内劳森氏菌的致病因子尚未被表征，甚至有人提出该细菌可以调节宿主的免疫反应，降低体内T和B淋巴细胞的数量(Gebhart,C.J.和Guedes，R.M.C.(2010).胞内劳森氏菌.动物细菌感染的发病机理,3,363-372)。

关于现有技术中公开的用于治疗动物疾病的解决方案，Kroll，J.J.等人的出版物(2004年)(评价口服胞内劳森氏菌无毒活疫苗后猪的保护性免疫.美国兽医研究杂志，65(5)，559-565)中，描述了一种用于猪的细胞内劳森氏菌的无毒活疫苗。所述出版物表明尚未充分探究细菌的免疫原性位点，并且最初的研究通常提到外膜蛋白和糖蛋白。而且，它强调与使用活的无毒细菌相比，单独使用抗原肽不会在动物中产生保护性免疫反应。

同时，美国专利9,636,389公开了一种对抗胞内劳森氏菌和另一种传染源的预防方法，其涉及施用经修饰的胞内劳森氏菌活菌株。Riber,U等人的最新出版物(2015)(对减毒的细胞内劳森氏菌的猪进行的疫苗接种诱导了急性期蛋白反应并引发了细胞介导的免疫,而攻毒后细菌的脱落却没有减少.疫苗,33(1),156-162)表明，当使用减毒活疫苗时，细胞内劳森氏菌(回肠炎，勃林格殷格翰公司)不可能从治疗的猪体内消除细菌，进一步表明应开发能够有效刺激T淋巴细胞的保护性疫苗。这些使用活细菌的解决方案具有很高的风险，因为它们可能会逆转其毒力并使被治疗的动物患病，从而产生不良的相反作用。

另一方面，美国专利9,463,231公开了一种药物组合物，其包含死亡的胞内劳森氏菌细菌与其他病原体抗原的混合物。在针对胞内劳森氏菌的重组疫苗中，已经公开了多种抗原，例如：核酸内切酶(申请US20070212373)，溶血素(美国专利7,029,683)，鞭毛蛋白(美国专利8,025,884)和位于所述细菌外膜中的蛋白质(US20110200631)。

尽管已经提供了几种控制动物增生性肠病的疫苗变体，但很少有疫苗变体进入市场并具有所需的保护功效。因此，仍然有必要以允许预防和控制该疾病的方式获得用于畜牧业的新的功能正常的疫苗。

附图说明

图1：合成抗原Invasq、OMP1q和OMP2q的表达盒的表示及其插入到载体pET-中。其中(A)对应于间隔基/6xHis；(B)T7终止子；以及(C)T7启动子/Lac算子。

图2：用考马斯蓝(A和C)染色的蛋白质的凝胶电泳(SDS-PAGE)，对应于大肠杆菌中表达的合成抗原Invasq、OMP1q和OMP2q；和免疫印迹(B和D)。图A和B显示了三种抗原的表达；以及C和D显示纯化的抗原作为包涵体。