[发明专利]生物分子偶联物及其用途

权利要求书

1.一个生物分子偶联物有以下结构：

R1-R2-R3-R4-S-Cys-R5

其中，

R5代表一个通过突变诱导一个或多个半胱氨酸残基的生物分子；

Cys代表包含在R5里的半胱氨酸残基；

S代表半胱氨酸残基上的硫原子；

R1是一个阻止R5与它的配体或受体结合的基团；

R2不存在，或者是一个可切割的连接臂，其可以一个或多个蛋白水解酶激活或者是一个可以在病理微环境中被酸性激活的一个化学键；

R3不存在，或者可以说是一个可以自动脱落的连接臂在R2被切割或者R2在病理微环境被酸激活之后；当R2不存在时，R3是一个可以在病理微环境被酸激活的一个化学键；

R4是一个可以与R5包含的半胱氨酸残基里的硫原子共价结合的基团，其作用是当R1-R2-R3被切割后，维持或者提高R5与其抗原的结合能力。

2.权利要求1中所描述的生物分子偶联物，其中R1选自包含聚乙二醇-C_1-5-烷基羰基的基团，

其中每个R独立地是C1-4烷基；每个n独立地是1至30000范围内的整数，例如1至15000，1至5000，1至2000，1至300，1至150，1至50，1至20的整数或3至12；聚乙二醇或Peg_m表示分子量为44至132000的聚乙二醇，例如1000至50000或10000至30000的聚乙二醇；m表示聚乙二醇的分子量；波浪线表示连接R2的R1的位置。

3.据权利要求1所述的生物分子偶联物，其中R1筛选自以下基团：

4.根据权利要求5所述的生物分子的偶联物，其中R2是能够被一种或多种蛋白水解酶，蛋白酶或肽酶活化或裂解的肽，其中所述蛋白酶选自半胱氨酸蛋白酶，天冬酰胺蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶，谷氨酸蛋白酶，苏氨酸蛋白酶，明胶酶，金属蛋白酶或天冬酰胺肽裂解酶；优选地，R2是能够被至少一种选自下组的酶切割的肽：天冬酰胺内肽酶，颗粒酶，组织蛋白酶B，组织蛋白酶C，组织蛋白酶D，组织蛋白酶E，组织蛋白酶K，组织蛋白酶L，激肽释放酶，hK1，hK10，hK15，纤溶酶，胶原酶，IV型胶原酶，星形胶质素，Xa因子，胰凝乳蛋白酶样蛋白酶，胰蛋白酶样蛋白酶，弹性蛋白酶样蛋白酶，枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶，猕猴桃蛋白酶，菠萝蛋白酶，钙蛋白酶，半胱天冬酶，半胱天冬酶-3，Mirl-CP，木瓜蛋白酶，HIV-1蛋白酶，HSV蛋白酶，CMV蛋白酶，凝乳酶，肽酶，间质蛋白酶，血浆蛋白酶，猪笼草蛋白酶，金属外肽酶，金属内肽酶，基质金属蛋白酶(MMP)，MMP1，MMP2，MMP3，MMP8，MMP9，MMP10，MMP11，MMP12，MMP13，MMP14，ADAM10，ADAM12，尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)，肠内激酶，前列腺特异性抗原(PSA，hK3)，白细胞介素-113转换酶，凝血酶，FAP(FAP-a)，跨膜肽酶，二肽基肽酶和二肽基肽酶四(DPPIV/CD26)。

5.根据权利要求1的生物分子的偶联物，其中R2是由-R2a，-R2b-，-R2a-N-，-R2a-D-，-R2a-AAN-，-R2a-AAD-代表的肽，或-R2a-R2b-；其中R2a是能够通过一种或多种蛋白水解酶在酰胺键上裂解的肽；R2b是在侧链上具有氮的肽，与R3形成氨基甲酸酯，其中氨基甲酸酯能够被一种或多种蛋白水解酶切割；A是丙氨酸；N是天冬酰胺，其侧链中的氮与R3形成氨基甲酸酯，其中氨基甲酸酯是能够的由天冬酰胺内肽酶切断；D是天冬氨酸，其侧链中的氮与R3形成氨基甲酸酯，氨基甲酸酯可被粒酶B裂解；

优选地，R2是三肽，其中与R1连接的三肽的第一个氨基酸残基选自Ala，Thr，Val和Ile，中间的第二个氨基酸残基选自Ala，Thr，Val和Asn，以及第三个氨基酸与R3连接的酸残基选自Asn和Asp；其中R2以酰胺，酯，氨基甲酸酯，脲或腙键的连接方式通过第一个氨基酸残基的氨基与R1连接，并通过第三个氨基酸残基的羧基以酰胺，酯，氨基甲酸酯，尿素或腙键连接方式与R3连接；优选地，三肽选自Ala-Ala-Asn和Ala-Ala-Asp。