[发明专利]模块化DNA组装系统

权利要求书

1.一种载体组，其包含至少两种穿梭载体V1和V2，

其中V1选自

V1.1(+)＝5’-A1 B1 M1 B2 C1 C2 A2-3’，

V1.2(-)＝5’-A1 C1 C2 B1 M1 B2 A2-3’，

V1.3(+)＝5’-A1 B2 M1 B1 C1 C2 A2-3’，和

V1.4(-)＝5’-A1 C1 C2 B2 M1 B1 A2-3’，

并且V2选自

V2.1(+)＝5’-C1 B1 M1 B2 A1 M2 A2 C2-3’，

V2.2(-)＝5’-C1 A1 M2 A2 B1 M1 B2 C2-3’，

V2.3(+)＝5’-C1 B2 M1 B1 A1 M2 A2 C2-3’，和

V2.4(-)＝5’-C1 A1 M2 A2 B2 M1 B1 C2-3’，

其中M1是第一标记，M2是第二标记，并且A1、A2、B1、B2、C1和C2是限制性酶识别位点，

其中至少A1、A2、C1和C2是IIS型限制性酶的识别位点，

其中A1、B1和C1是全都不同的识别位点，并且

其中A1＝A2、C1＝C2并且B1＝B2或B1≠B2。

2.权利要求1所述的载体组，其包含至少三种、优选地至少四种、优选地至少五种、优选地至少六种、优选地至少七种、优选地八种不同的穿梭载体。

3.权利要求1或2所述的载体组，其中A1、A2、B1、B2、C1和C2包含至少四种、优选地至少六种IIS型限制性位点，优选地其中所述IIS型限制性位点选自BsaI、AarI、BsmBI、AcuI、AlwI、BaeI、BbsI、BbvI、BccI、BceAI、BcgI、BciVI、BcoDI、BfuAI、BmrI、BpmI、BpuEI、BsaXI、BseRI、BsgI、BsmAI、BsmFI、BsmI、BspCNI、BspMI、BspQI、BsrDI、BsrI、BtgZI、BtsCI、BtsI、BtsIMutI、CspCI、EarI、EciI、FauI、FokI、HgaI、HphI、HpyAV、MboII、MlyI、MmeI、MnlI、NmeAIII、PleI、SapI、SfaNI位点，优选地A1和A2是AarI限制性位点，优选地B1和B2是BsaI限制性位点，和/或优选地C1和C2是BsmBI限制性位点。

4.权利要求1至3中任一项所述的载体组，其还包含源载体或终载体或两者，优选地其中所述终载体包含与A1和A2或与C1和C2相同的一对限制性位点，其中所述终载体任选地包含侧翼带有所述一对限制性位点的标记(DM)，其中所述DM在存在时，与所述V2穿梭载体中的M2相同。

5.权利要求1至4中任一项所述的载体组，其包含如下的至少四种穿梭载体：

(a)至少两种V1载体和至少两种V2载体，

(b)至少一种V1载体和至少三种V2载体，或

(c)至少三种V1载体和至少一种V2载体，

其中(a)、(b)和(c)各自包含至少一种(-)载体和至少一种(+)载体，

优选地包含如下的至少五种穿梭载体：

(d)至少两种V1载体和至少三种V2载体，

(e)至少三种V1载体和至少两种V2载体，

(f)四种V1载体和至少一种V2载体，或

(g)至少一种V1载体和四种V2载体，

其中(d)、(e)、(f)和(g)各自包含至少一种(-)载体和至少一种(+)载体，

优选地包含如下的至少六种穿梭载体：

(h)至少三种V1载体和至少三种V2载体，

(i)四种V1载体和至少两种V2载体，

(j)至少两种V1载体和四种V2载体，

其中(i)和(j)各自包含至少一种(-)载体和至少一种(+)载体，

优选地包含如下的至少七种穿梭载体：

(k)至少三种V1载体和四种V2载体，

(l)四种V1载体和至少三种V2载体。