[发明专利]用于肽晶体的分离、洗涤和干燥的集成的自动化过滤

说明书

本发明描述了将制备型结晶、晶体分离、晶体洗涤和冷冻干燥过程集成为使用加压过滤的单一连续方法。该方法有助于减少时间，并且概述了使用多次有机溶剂洗涤和氮气吹扫以除去吸收的水的新设计并且实现了符合质量规格的最终药物物质。

技术领域

本发明涉及生物制剂的下游加工，更具体地，涉及胰岛素及其类似物的下游加工。本发明还涉及将晶体分离，其后的晶体洗涤和冷冻干燥集成于用于纯化胰岛素及其类似物的单一连续方法。

背景技术

传统上，制备型蛋白质结晶涉及一系列洗涤(沉降晶体的洗涤)和重力沉降步骤。制备型蛋白质结晶的终产物通过真空辅助的冷冻干燥被进一步处理从而获得干粉形式的药物物质(DS)。所得的药物物质必须在残留物质(RS)分析，水分含量(干燥损失LOD)，硫酸盐灰分含量(ROI)和残留溶剂限制方面符合根据通用质量和管理规格的纯度。制备型结晶，晶体在池中的沉降和洗涤以符合所需的质量要求以及冷冻干燥的整个过程在商业规模上需要最少7天。显然，该过程的不连续和模块化的性质使其是能量、成本和时间密集型的。

在WO2015084694，US8769841，WO1996040730，CN103512318和US6408536中已公开胰岛素或胰岛素类似物的结晶和纯化的方法。

WO2015084694描述了用于在碱性条件下使胰岛素或胰岛素类似物结晶和通过过滤器过滤并干燥在过滤器上捕获的晶体来纯化晶体以制备结晶的胰岛素或胰岛素类似物晶体组合物的方法。在结晶后，倒出的全部体积的晶体悬液然后被转移至过滤设备。WO2015084694中描述的过滤设备是搅拌型Nutsche过滤器，其具有孔径约5μm的不锈钢筛网。

US8769841公开了冷冻干燥基本上水溶液的方法，其包括具有第一温度和压力水平的至少一个第一步(即初级干燥阶段)和在第一步之后的具有第二温度和压力水平的至少一个第二步(即第二干燥阶段)。

WO1996040730公开了回收作为粉末的无法通过沉淀或结晶及随后的自水溶液过滤回收的酰化蛋白质的方法。酰化蛋白质是某些酰化胰岛素原、胰岛素和胰岛素类似物。所述方法由以下组合组成：调节水溶液至接近蛋白质的等电pH并且提供合适的醇浓度以使得蛋白质在调节的pH以可过滤颗粒的形式沉淀。

CN103512318公开了涉及胰岛素的冻干处理的药物纯化干燥方法，其中所述方法公开了用于胰岛素的冷冻干燥工序。杂质含量低于常规技术。该方法避免了使用有机溶剂，排除了对人和环境的潜在不良作用，并且节省了2-3天的干燥时间并且提高了工业生产率。

US6408536公开了从含水蛋白质晶体悬液干燥蛋白质晶体的方法。该方法由以下组成：从水性悬液滤出晶体，洗涤滤饼，离心干燥滤饼，在流化床中利用湿润的氮气流干燥晶体并且使用氮气压力冲击将干燥的晶体清空到带凸缘的容器中。

虽然若干方法可用于使胰岛素及其类似物结晶，但是需要开发备选的方法以具有可以在工业上在以相同原理工作的更大规模设备中实施的简单且优化的结晶、晶体洗涤和分离以及晶体干燥的工序。

本发明提供用于分离和干燥胰岛素及其类似物的集成的简单方法。

发明目的

本发明的目的是将离散的结晶、晶体洗涤和冷冻干燥的过程集成为使用加压过滤的单一连续方法，同时实现相当的关键质量属性和工序性能属性标准。

发明内容

本发明描述了将制备型胰岛素和胰岛素类似物结晶、晶体分离和冷冻干燥过程集成为使用加压过滤的单一连续方法。该方法有助于减少时间，并且概述了将多次有机溶剂洗涤和氮气吹扫用于除去吸收的水的新设计并且实现了符合主要质量规格的最终药物物质。

附图说明

图1显示用于胰岛素和胰岛素类似物纯化的加压过滤的方法的流程图。

图2显示实验室级加压过滤器的代表性图像。